2 Metodi di tecniche di elettroimmunodiffusione per l'antigene e l'anticorpo

Nelle tecniche di immunodiffusione, l'antigene e l'anticorpo possono diffondersi per formare una linea di precipitina e questo richiede più tempo (24-72 ore).

Se il movimento dell'antigene e / o anticorpo viene effettuato più rapidamente, la linea precipitina si formerà in un tempo molto breve, in modo che la diagnosi possa essere fatta rapidamente. Questo obiettivo viene raggiunto spostando elettricamente l'antigene e l'anticorpo. Ci sono molte varianti di questo principio. I due metodi comuni in uso sono l'immunoelettroforesi controcorrente e l'elettroforesi su razzo di Laurell.

Immunoelettroforesi controcorrente (doppia elettroimmunodiffusione monodimensionale):

Due pozzetti vengono tagliati nell'agar su una diapositiva.

Un pozzetto è riempito con antigene e l'altro è pieno di anticorpi.

Il lato dell'anticorpo dell'agar è collegato all'anodo e il lato dell'antigene è collegato al catodo dell'apparato di elettroforesi.

Dopo l'applicazione dell'elettricità, le molecole dell'antigene e dell'anticorpo si muovono (a causa delle loro cariche elettriche) nell'agar sotto l'influenza elettrica.

In un tampone alcalino, la maggior parte degli antigeni clinicamente importanti sono elettronegativi e quindi si spostano verso l'anodo (cioè verso il pozzetto anticorpale). Le molecole anticorpali sono elettricamente neutre o debolmente negative. Normalmente le molecole anticorpali elettricamente negative dovrebbero spostarsi verso l'anodo.

Ma il movimento degli ioni hydroneum nell'agar durante l'elettroforesi è molto forte e trascina le molecole anticorpali debolmente negative verso il catodo (cioè verso il pozzetto dell'antigene). Poiché le molecole dell'antigene e degli anticorpi si muovono in direzioni opposte, si incontrano e formano una linea precipitina tra i due pozzetti. La linea precipitina è visibile in 30 minuti (rispetto a 24 ore in diffusione) ed è circa 10 volte più sensibile della diffusione.

Immunoelettroforesi controcorrente viene utilizzata per rilevare

un. Antigeni meningococcici, criptococali ed emofilici nel liquido cerebrospinale e

b. Antigene di superficie dell'epatite B nel siero.

Elettroforesi a razzo di Lauren (Elettroimmunodiffusione singola monodimensionale):

Questa tecnica è usata per quantificare gli antigeni. L'anticorpo viene miscelato con agar fuso e versato su vetrino. Dopo la solidificazione, i pozzetti vengono tagliati e riempiti con diverse concentrazioni di antigene.

Quando viene applicata l'elettricità, l'antigene viene introdotto nell'agar contenente gli anticorpi. Le linee della precipitazione si formano lungo i margini laterali del limite mobile dell'antigene. A poco a poco, l'antigene viene perso per precipitazione, così che la sua concentrazione sul bordo anteriore diminuisce e i margini laterali convergono per formare un punto acuto. Quindi il modello risultante di precipitazione assomiglia a un picco oa un razzo.

La distanza del picco dal pozzetto dell'antigene aumenta con l'aumento della concentrazione dell'antigene. Una curva standard può essere stabilita usando concentrazioni note di antigeni. La concentrazione di un antigene di prova può essere determinata mediante interpolazione della curva standard con la distanza del razzo formato.

La sensibilità di questa tecnica è di circa 0, 5 mg / ml. La tecnica di Laurell viene anche utilizzata per rilevare antigeni di criptococco, meningococco e emofilo nel liquido cerebrospinale (CSF).


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