Test di fermentazione dei carboidrati sui batteri per scoprire la loro capacità di fermentare i carboidrati

Test di fermentazione dei carboidrati sui batteri per scoprire la loro capacità di fermentare i carboidrati!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di fermentare i carboidrati, in particolare gli zuccheri. Tra questi, ogni batterio può fermentare solo alcuni zuccheri, mentre non può fermentare gli altri.

Quindi, gli zuccheri, che un batterio può fermentare e gli zuccheri, che non può essere la caratteristica dei batteri.

Il test di fermentazione dei carboidrati viene eseguito per testare, separatamente, la capacità dei batteri di fermentare gli zuccheri come glucosio, saccarosio, lattosio, maltosio e xilosio, nonché i loro derivati alcolici come l'esculina, la salicina, l'adonitolo, il dulcitolo e il sorbitolo. Se i batteri possono fermentare uno zucchero o un derivato zuccherino, viene prodotto acido, che riduce il pH cambiando il colore del bromocresolo viola da porpora a giallo.

Inoltre, se si tratta di un "batterio aerogenico", si producono sia acido che gas (C0 ₂ ), mentre se si tratta di batteri anaerogenici, solo l'acido viene prodotto senza alcun gas. La produzione di gas è indicata dal suo accumulo come una bolla in una provetta di Durham invertita (una provetta in miniatura).

Nel test di fermentazione dei carboidrati, i batteri test vengono coltivati in un mezzo di brodo contenente uno degli zuccheri o derivati dello zucchero e bromocresolo porpora. Tiene immerso un tubo di Durham invertito.

Se i batteri "hanno la capacità di fermentare lo zucchero o il derivato zuccherino, il colore del brodo cambia da porpora a giallo. Se l'accumulo di gas è visto come una bolla nella provetta di Durham, si tratta di un batterio acrogenico, mentre se non si nota l'accumulo di gas, si tratta di un batterio anaerogenico.

Materiali richiesti:

Provette, provette Durham, matraccio conico, tappi in cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, brodo di carboidrati (brodo contenente zucchero specifico o derivati zuccherini come glucosio, saccarosio, lattosio, maltosio, xilosio, esculina, salicina, adonitolo, dulcitolo, sorbitolo ecc.), colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del mezzo di brodo di carboidrati (contenente il carboidrato richiesto e il bromocresolo porpora come componenti principali) o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del brodo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in un matraccio conico da 250 ml agitando e roteando (Figura 7.8).

2. Il suo pH viene determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 6, 8 usando 0, 1 N HC1 se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore. Il pallone viene riscaldato, se necessario, per sciogliere completamente gli ingredienti.

3. Il brodo viene distribuito in cinque provette (circa 10 ml ciascuna).

4. Una provetta di Durham viene posta nella condizione invertita nel brodo in ciascuna provetta. Le provette di Durham contengono aria e galleggiano. Durante la sterilizzazione, il vapore caldo sposta quest'aria, grazie alla quale si immergono nel brodo. Pertanto, non è necessario rimuovere l'aria dall'interno dei tubi Durham riempiendoli con il brodo prima della sterilizzazione per tenerli immersi nel brodo.

5. Le provette sono tappate in cotone, coperte con carta artigianale e legate con filo o elastico.

6. I tubi di brodo sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave. In alternativa, 90 ml del terreno basale (mezzo senza carboidrati) vengono sterilizzati nell'autoclave e a questo, dopo raffreddamento, vengono aggiunti 10 ml della soluzione di carboidrati (10%) sterilizzata mediante filtrazione su membrana. Questo è particolarmente essenziale per i carboidrati sensibili al calore, che subiscono degrado durante la sterilizzazione a caldo.

7. I tubi di brodo sono lasciati raffreddare a temperatura ambiente.

8. I batteri test vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, nel brodo con l'aiuto di un ciclo di inoculo sterilizzato su fiamma bunsen. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

9. Le provette di brodo inoculato vengono incubate a 37 ° C per 24 ore in un incubatore.