Test della coagulasi sui batteri per scoprire le loro capacità di coagulare il sangue (con la figura)

Test della coagulasi sui batteri per scoprire le loro abilità di coagulare il sangue (con la figura)!

Principio:

I ceppi patogeni dei batteri Staphylococcus contengono l'enzima coagulasi, che agisce all'interno dei tessuti ospiti per convertire il fibrinogeno in fibrina.

Il reticolo fibrinoso che si forma circonda le cellule batteriche oi tessuti infetti, proteggendo i batteri da meccanismi di resistenza dell'ospite non specifici, come la fagocitosi e l'attività anti-stafilococco del siero normale.

Questo enzima aiuta anche nella coagulazione del sangue nell'ospite essendo un precursore della sostanza simile alla trombina, che coagula o coagula il sangue. Il test della coagulasi viene eseguito per distinguere tra stafilococco positivo (patogeno o virulento) positivo e coagulasi (non patogeno o avirulento).

Nel test della coagulasi, una sospensione della specie test di Staphylococcus viene miscelata con plasma sanguigno e il plasma inoculato viene quindi periodicamente esaminato per la formazione di fibrina o la coagulazione.

La formazione di coaguli entro quattro ore è interpretata come un risultato positivo e indicativo di un ceppo di Staphylococcus virulento (patogeno). L'assenza di coagulazione dopo 24 ore di incubazione è un risultato negativo, indicativo di un ceppo virulento (non patogeno).

Materiali richiesti:

Animale da laboratorio (coniglio o porcellino d'India), siringa, anticoagulante (citrato di sodio o eparina), provette per prelievo di sangue, centrifuga, provette, scivolo, ansa da inoculo, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, colonie isolate o colture pure di batteri del genere Staphylococcus.

Procedura:

1. La siringa e le provette per la raccolta del sangue vengono lavate con una soluzione di citrato di sodio o eparina, in modo da evitare la coagulazione del sangue immediatamente dopo la raccolta (Figura 7.24).

2. Con l'aiuto della siringa, il sangue viene raccolto da animali di laboratorio come il coniglio o la cavia e immesso nei tubi di raccolta.

3. Il sangue viene centrifugato a 3000 rpm per 15 minuti in una centrifuga.

4. Il supernatante (plasma) viene raccolto in un'altra provetta citrata e il residuo (cellule del sangue) scartato.

(a) Metodo di scorrimento:

1. Due gocce di una sospensione dei batteri test appartenenti al genere Staphylococcus sono poste su due metà equamente divise di una diapositiva con l'aiuto di un'ansa da inoculo. Una goccia viene usata come 'controllo' per vedere se il batterio stesso è in ciuffi e l'altra goccia è usata come 'test'.

2. Alla "goccia di prova", viene aggiunta una goccia di plasma raccolto, miscelato e incubato a temperatura ambiente.

3. Le gocce si osservano ad intervalli di un'ora fino a 4 ore.

(b) Metodo del tubo:

1. Vengono prese due piccole provette. Una provetta è contrassegnata con 'test' e l'altra 'controllo'. In ciascuna provetta vengono prelevati 0, 5 ml di sospensione batterica.

2. Alla provetta "test", 1 ml di plasma viene aggiunto, miscelato e incubato

3. Le provette vengono osservate ad intervalli di un'ora fino a 4 ore.