Esperimento per scoprire la capacità dei batteri di decarbossilare diversi amminoacidi (con figura)

Sperimenta per scoprire la capacità dei batteri di decarbossilare diversi aminoacidi!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di decarbossilare diversi amminoacidi alle corrispondenti ammine e CO ₂ in quanto possono produrre rispettivi enzimi "aminoacidi decarbossilasi".

Tra questi, ogni batterio può decarbossilare solo alcuni degli aminoacidi, mentre non può decarbossilare gli altri.

Quindi, gli aminoacidi, che un batterio può decarbossilare e gli amminoacidi, che non può essere la caratteristica dei batteri. Il test dell'amminoacido decarbossilasi viene eseguito per testare, separatamente, la capacità di un batterio di decarbossilare aminoacidi come lisina, ornitina e argentina con produzione di C0 ₂ e rispettive ammine come la cadaverina, la putrescina e l'agmatina.

Se i batteri possono

decarbossilate uno o più degli amminoacidi, sono prodotte le rispettive ammine, che sono alcaline (basiche) e quindi, aumentano il pH cambiando il colore del bromocresolo porpora da giallo a porpora.

Nel test dell'amminoacido decarbossilasi, i batteri test vengono coltivati anaerobicamente in un mezzo di brodo contenente glucosio, bromocresolo porpora e uno degli aminoacidi. Il colore del brodo cambia inizialmente da porpora a giallo a causa della caduta del pH risultante dagli acidi prodotti dalla fermentazione del glucosio. Se i batteri hanno la capacità di decarbossilare l'amminoacido, il colore del brodo cambia da giallo a porpora.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, brodo decarbossilasi di aminoacidi, amminoacidi (lisina, ornitina, arginina), paraffina liquida, colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del mezzo di brodo di decarbossilasi amminoacido (contenente glucosio e bromocresolo porpora come componenti principali) o la sua polvere pronta per l'uso richiesta per 400 ml del brodo vengono pesati e sciolti in 400 ml di acqua distillata in un matraccio conico da 500 ml agitando e roteando (Figura 7.11).

2. Il suo pH viene determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 2 usando HC1 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore. Il pallone viene riscaldato, se necessario, per sciogliere completamente gli ingredienti.

3. Il brodo da 400 ml viene distribuito in quattro matracci conici da 250 ml, in modo che ogni beuta contenga 100 ml di brodo.

4. A tre di questi matracci, tre amminoacidi come la lisina, l'ornitina e l'arginina vengono aggiunti separatamente (0, 5 grammi ciascuno) e uno viene mantenuto senza alcun amminoacido per fungere da controllo. Il controllo è usato per distinguere tra le variazioni di colore in due fasi nel mezzo di prova (cioè da viola a giallo e da giallo a porpora).

5. I brodi nei quattro matracci conici sono distribuiti in quattro set separati di provette (circa 10 ml ciascuno), con tappo di cotone, ricoperti con carta artigianale e legati con filo o elastico.

6. I tubi di brodo sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

7. I tubi di brodo sono lasciati raffreddare a temperatura ambiente.

8. La paraffina liquida viene sterilizzata riscaldando a 180 ° C per 3 ore in un forno ad aria calda.

9. I batteri di prova vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, nel brodo con l'aiuto di un ciclo di inoculo sterilizzato su fiamma bunsen. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

10. La paraffina liquida sterilizzata viene delicatamente versata in modo asettico nelle provette inoculate (circa 1 cm di altezza sul terreno) per fornire condizioni anaerobiche.

11. Le provette di brodo inoculato vengono incubate a 37 ° C in un incubatore e osservate quotidianamente fino al test positivo o per un periodo massimo di 4 giorni.