Esperimento per l'identificazione di batteri sconosciuti (con figura)

Esperimento per l'identificazione di batteri sconosciuti!

Principio:

L'identificazione di batteri sconosciuti è una delle principali responsabilità dei microbiologi. Campioni di sangue, tessuti, cibo, acqua e cosmetici sono esaminati giornalmente nei laboratori di tutto il mondo per la presenza di microrganismi contaminanti.

Inoltre, le organizzazioni industriali controllano costantemente i materiali per isolare nuovi microbi o microbi che producono antibiotici e aumentano la produzione di prodotti commerciabili, come vitamine, solventi ed enzimi. Una volta isolati, questi microbi sconosciuti devono essere identificati e classificati.

La scienza della classificazione è chiamata tassonomia e si occupa della separazione degli organismi viventi in gruppi interconnessi. Bergey's Manual of Determinative Bacteriology, 8a edizione, è la chiave tassonomica ufficiale contenente gli ordini, le famiglie, i generi e le specie di tutti i batteri classificati noti (Appendice III).

Con la conoscenza fondamentale dei metodi di colorazione, tecniche di isolamento, nutrizione batterica, attività biochimiche e caratteristiche di crescita dei batteri, diventa più facile identificare eventuali batteri sconosciuti.

Le caratteristiche di pochi batteri sono state fornite nella Tabella 7.2. Altri batteri possono essere identificati in modo simile sulla base delle osservazioni e dei risultati ottenuti seguendo le procedure sperimentali.

Materiali richiesti:

Scivoli, cavità vetrini, piastre Petri, matracci conici, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, brodo nutriente, agar nutriente, reagenti per colorazione grammi, terreni e reagenti per test biochimici, microscopio composto colonie isolate o pure culture di batteri.

Procedura:

1. Viene eseguita la colorazione di Gram dei batteri sconosciuti. Oltre alla colorazione del grammo, vengono registrati anche la sua morfologia e disposizione. Il test di motilità dei batteri è determinato dalla sospensione appesa (Figura 7.25).

2. Usando una tecnica di inoculo sterile, i batteri vengono inoculati in due slant di agar nutrienti, un tubo di brodo nutriente e una piastra di agar nutritiva mediante inoculazione a striscia. Dopo l'incubazione, viene utilizzata una coltura inclinata per determinare le caratteristiche culturali dei batteri sconosciuti.

Il secondo viene utilizzato come sub-cultura di magazzino, qualora fosse necessario ripetere uno dei test. Le caratteristiche di crescita sono anche osservate nel tubo di brodo e nelle caratteristiche della colonia sulla piastra.

3. Esercitando la cura in tecnica sterile, in modo da non contaminare le colture e quindi ottenere risultati spuri, i batteri vengono inoculati nei rispettivi mezzi per effettuare i diversi test biochimici.

4. I terreni inoculati vengono incubati alle temperature richieste per i periodi di tempo richiesti.

osservazioni:

1. Nella colorazione del grammo, oltre alla reazione del grammo, vengono registrati anche la morfologia e la disposizione dei batteri.

2. Si notano le caratteristiche culturali dei batteri presenti nel brodo nutriente, sull'agro e sulla piastra agar nutritiva.

3. I risultati delle reazioni biochimiche sono registrati.

Interpretazione dei risultati:

1. Usando i dati registrati sopra (ad esempio, vedere la Tabella 7.1) e con l'aiuto del Manuale di Bergey della Batteriologia Determinativa, il batterio viene identificato per il suo genere e specie. Va tenuto presente che i risultati potrebbero variare in base ai ceppi di ciascuna specie utilizzata e al periodo di tempo in cui i batteri sono stati mantenuti in coltura.

I risultati osservati potrebbero non essere completamente identici ai risultati attesi. Pertanto, vengono scelti i batteri che meglio si adattano ai risultati. Le caratteristiche identificative di pochi batteri sono riportate nella Tabella 7.2.

2. In alternativa, utilizzando i dati sopra registrati, vengono forniti i numeri di codice per i risultati registrati (vedere la Tabella 7.3) ei batteri identificati facilmente con l'aiuto del programma per computer disponibile per Apple II, IBM PC o TRS-80.

Il programma è progettato per identificare i batteri sconosciuti sulla base della percentuale di somiglianza tra i batteri sconosciuti e i batteri noti rispetto alle osservazioni di cui sopra.

Per avviare il programma per Apple II o IBM-PC:

(a) Il disco è inserito nell'unità di sinistra.

(b) Il computer è acceso.

(c) Le istruzioni del programma sono seguite digitando le risposte, il numero di batteri sconosciuti ei numeri di codice mentre le domande compaiono sullo schermo.

Per avviare il programma per il TRS-80:

(un) Il computer è acceso.

(B) Il disco è inserito nell'unità in basso.

(C) Il pulsante arancione viene premuto.

(D) Quando viene richiesto, viene inserito "data (MM / GG / AA)".

(E) Il pulsante arancione viene nuovamente premuto.

(f) Le istruzioni del programma sono seguite digitando le risposte, il numero di batteri sconosciuti e i numeri di codice mentre le domande compaiono sullo schermo.

E. Metodi automatizzati di identificazione dei batteri sconosciuti:

L'identificazione di batteri sconosciuti con il metodo manuale utilizzando reazioni di colorazione, test di motilità, caratteristiche culturali e test biochimici è un processo macchinoso, lungo e lungo. Per rendere il processo facile e breve, sono stati sviluppati metodi automatici.

Questi metodi utilizzano fondamentalmente gli stessi test biochimici utilizzati nei metodi manuali, ma qui viene eseguito in modo automatico e l'interpretazione viene eseguita con un programma assistito da computer.

Due di questi sistemi attualmente utilizzati per l'identificazione automatica dei batteri sono dati come segue:

1. Sistema MINI API

2. Sistema VITEK 2

F. Ulteriore conferma:

(1) Test sierologici:

Test sierologici possono essere eseguiti per ulteriore conferma dei batteri identificati. Per una sospensione dei batteri identificati (ad esempio X), una goccia dell'antisiero (anti-X) contro i batteri viene miscelata. Se risulta nella formazione di ciuffi o precipitati (complesso X-anti-X), allora l'identificazione è confermata.

Gli antisieri per diversi batteri sono disponibili in commercio. Sono prodotti commercialmente in diversi laboratori. L'antisiero di particolari batteri viene prodotto iniettando cellule uccise o attenuate di quei batteri (ad esempio X) in un animale da laboratorio.

Come meccanismo di difesa, l'animale ospite produce anticorpi (anti-X) contro quel batterio, che rimane nel sangue. Il sangue viene raccolto da questo animale e il suo siero isolato con tecniche speciali. Questo siero, contenente anticorpi contro quel batterio, è chiamato antisiero di quei batteri.

(2) Test PCR:

Il test della Polymerase Chain Reaction (PCR) è un metodo molecolare rapido per la conferma dei batteri identificati. Questa tecnica è molto spesso utilizzata per il rilevamento di vari batteri e virus in modo rapido e preciso.