Esperimento: test di motilità di un batterio: mediante sospensione della preparazione (con figura)

Cerca di eseguire un test di motilità di un batterio, appendendolo alla preparazione delle gocce, per scoprire se è mobile o non mobile.

Scopo:

Motilità significa capacità di movimento con il proprio potere. Sulla base della motilità, i batteri possono essere divisi in due gruppi come segue.

(1) Motili Bacteria:

Un batterio, che ha l'intrinseca capacità di movimento nel mezzo circostante, in cui rimane sospeso, è un batterio mobile.

(2) Batteri non mobili:

Un batterio, che non ha l'intrinseca capacità di movimento nel mezzo circostante, in cui rimane sospeso, è un batterio non mobile. I batteri non mobili possono mostrare motilità apparente, risultante dal loro movimento browniano causato dal bombardamento delle molecole d'acqua nel mezzo circostante, sulle cellule batteriche.

Nel supporto bagnato, sebbene la forma e la dimensione dei batteri possano essere osservate, la motilità può essere ostacolata, poiché la sospensione viene premuta tra il vetrino e il vetrino. È per questo; viene eseguita una sospensione di sospensione o un test di motilità per una chiara osservazione della motilità dei batteri, oltre alla loro forma e dimensione. È utile per l'identificazione dei batteri.

Principio:

Una piccolissima goccia di sospensione di batteri viene appesa dal centro di un vetrino coprioggetto nella cavità di uno scivolo a cavità. La goccia pendente è osservata al microscopio usando l'obiettivo di immersione in olio. Se i batteri sono mobili, le sue cellule possono avere movimenti irregolari nel mezzo circostante.

Al contrario, se non è mobile, le sue cellule rimangono statiche nel mezzo senza alcun movimento o possono mostrare movimento browniano risultante dal bombardamento da parte delle molecole d'acqua nel mezzo, sulle cellule dei batteri.

Materiali richiesti:

Vetrino per cavità, vetrino coprioggetto, vaselina o vaselina, olio per immersione, coltura di batteri del brodo di 24 ore, loop e microscopio (composto, campo scuro o contrasto di fase).

Procedura:

1. Un vetrino della cavità viene pulito correttamente sotto l'acqua del rubinetto, in modo che l'acqua non rimanga come gocce sulla sua superficie. Uno scivolo a cavità è un vetrino con una piccola depressione circolare al centro, in cui può essere appesa una piccola goccia di sospensione di batteri (Figura 5.3).

2. Il vetrino viene asciugato strofinando con carta bibula e successivamente, spostandolo sulla fiamma o tenendolo al sole.

3. Un anello di vaselina (o vaselina) viene applicato attorno alla cavità.

4. Un ciclo è sterilizzato su fiamma e raffreddato. Un litro di sospensione di batteri viene prelevato asetticamente dalla vecchia broduzione di 24 ore. Una piccola goccia della sospensione è posta al centro di una copertina. La cultura del brodo non dovrebbe essere più vecchia di 24 ore, perché i batteri possono perdere la loro motilità man mano che invecchiano.

5. Lo scivolo della cavità è invertito e posizionato sul vetrino coprioggetto, in modo che la cavità copra la goccia.

6. Il vetrino e il vetrino coprioggetto vengono premuti delicatamente insieme, in modo che la cavità sia sigillata. Bisogna fare attenzione a vedere che nessuna parte della cavità tocca la goccia.

7. Il vetrino viene invertito rapidamente, in modo tale che la goccia si blocchi nella cavità senza toccarla.

8. La diapositiva viene tagliata sul palco del microscopio.

9. Il bordo della goccia è focalizzato sotto l'obiettivo di bassa potenza.

I motivi per focalizzare il vantaggio del calo sono i seguenti:

(a) Si ottiene un contrasto migliore a causa della differenza nell'indice di rifrazione della goccia e del vetrino coprioggetto.

(b) Mentre la goccia si blocca, si assottiglia verso il bordo, per il quale il bordo contiene meno numero di batteri da osservare chiaramente per la motilità.

(c) Di solito i batteri aerobi arrivano verso il bordo per ottenere più ossigeno per la respirazione, per il quale possono essere osservati sul bordo.

10. Una goccia di olio per immersione viene applicata sul vetrino di copertura appena sopra la goccia pendente e il bordo della goccia pendente viene osservato sotto l'obiettivo di immersione dell'olio del microscopio. Preferibilmente, un microscopio a contrasto di fase o campo scuro dovrebbe essere usato per una chiara osservazione.

Osservazioni (sotto l'obiettivo di immersione in olio):

1. Motilità:

Motivo o non mobile

2. Forma dei batteri:

Sferico (coccus)

A forma di bastoncello (bacilli)

Simile a virgola (vibrione)

Spirale (spirochete)

3. Disposizione dei batteri:

Coppie (diplobacillus / diplococcus)

A quattro (tetradi)

In catene (streptococco / streptococco)

Grappoli d'uva (staphylococcus)

Cuboidal (sarcinae o ottetto).

4. Dimensione dei batteri:

Con la stima dell'occhio, fai il disegno del campo sotto l'obiettivo di immersione in olio.

(3) colorazione:

Scopo della colorazione:

L'indice di rifrazione delle cellule batteriche è molto vicino a quello dell'acqua, in cui sono sospese durante l'osservazione e anche a quella del vetrino, sul quale sono osservate al microscopio. Pertanto, è molto difficile osservarli chiaramente.

Per superare questa difficoltà, le cellule sono colorate da macchie che conferiscono colore intenso alle cellule e colore chiaro al mezzo circostante, nel quale sono sospese. Le cellule di colore scuro hanno un chiaro contrasto con lo sfondo chiaro e possono essere osservate chiaramente.

Pertanto, la colorazione è un metodo per impartire colore ai microrganismi trasparenti altrimenti incolori con l'aiuto di vari coloranti biologici chiamati "macchie" per la loro osservazione microscopica.

Chimica delle macchie:

Gli agenti coloranti sono di tre tipi come segue:

1. coloranti:

Sono utilizzati per la colorazione generica come, per colorare i materiali tessili e per colorare le pareti.

2. Macchie:

Sono usati per colorare campioni biologici o microbiologici. Questi sono più precisi e precisi.

3. Indicatori:

Sono sostanze chimiche che cambiano colore con il cambiamento della concentrazione di ioni idrogeno (pH).

Anche se "macchia" è il termine appropriato, il termine "colorante" è ampiamente utilizzato in microbiologia per indicare gli agenti coloranti. In passato, coloranti naturali venivano preparati da varie piante. Sono stati ampiamente sostituiti da coloranti sintetici.

Poiché il primo colorante sintetico è stato preparato dall'anilina, tutti i coloranti sintetici sono chiamati "coloranti all'anilina". Tuttavia, la maggior parte di questi coloranti viene ora prodotta con catrame di carbone per il quale vengono ora chiamati "coloranti di catrame di carbone". I coloranti di catrame di carbone sono derivati ​​del benzene. Una molecola di colorante è composta da tre componenti (Figura 5.4) come indicato di seguito.

(a) Un anello di benzene

(b) Un gruppo cromoforo

(c) Un gruppo auxocromo

Il benzene è un solvente organico incolore, mentre il cromoforo è il componente colorante della tintura. Il benzene si combina con il cromoforo per formare il cromogeno (Figura 5.5). Poiché il cromogeno non possiede la proprietà di dissociarsi, non può combinarsi con le cellule ed è facilmente lavato via.

Quando un cromogeno si combina con un auxocromo, si forma un colorante o una macchia. L'auxocromo conferisce alla tintura la proprietà di dissociazione elettrolitica (proprietà di formazione del sale). Pertanto, chimicamente una macchia viene definita come un composto organico contenente un anello benzenico, un gruppo cromoforo e un gruppo auxocromo.

Tipi di colorazione:

La colorazione dei batteri è di diversi tipi come descritto di seguito (Figura 5.6).

I. Semplice colorazione:

Qui, viene usata solo una macchia. Questa colorazione viene utilizzata per osservare la forma (cocchi, bacilli, vibrio, spirilli) e la disposizione (singolo, coppia, tetrado, catena, ammasso) di batteri.

È di due tipi come segue:

A. colorazione di base:

Nella colorazione basica, una macchia basica, come il blu di metilene, il cristal violetto o il carbol fuchsin, viene usata per macchiare le cellule batteriche. La macchia si lega strettamente alle cellule dei batteri e conferisce un colore profondo della macchia alle cellule, mentre il terreno circostante ottiene un colore chiaro della macchia.

B. Colorazione acida:

Nella colorazione acida, una macchia acida, come eosina o nigrosina, viene utilizzata per macchiare negativamente le cellule batteriche. La macchia rende i colori circostanti, mentre la cellula batterica rimane incolore.

II. Colorazione differenziale:

Qui vengono usate più di una macchia. Viene eseguito per i seguenti scopi.

A. Separazione in gruppi:

Questi metodi di colorazione differenziale vengono eseguiti per differenziare i batteri in diversi gruppi in base alle loro caratteristiche di colorazione.

Questi metodi includono quanto segue:

(un) Colorazione Gram:

Questo metodo di colorazione viene eseguito per distinguere tra batteri gram-positivi e gram-negativi.

(b) Colorazione acido-rapida:

Viene eseguito per differenziare i batteri acido-veloce e non acido-veloce.

B. Visualizzazione di strutture specifiche di batteri:

Questi metodi di colorazione differenziale vengono eseguiti per visualizzare specifici componenti strutturali delle cellule di batteri.

Questi metodi includono quanto segue:

(un) Colorazione spore:

Questo metodo di colorazione è usato per colorare endospora di batteri sporigeni.

(b) Colorazione capsula:

Questo metodo viene utilizzato per colorare la capsula, che circonda i batteri capsulati.

(c) Flagella Staining:

Viene eseguito per visualizzare flagelli di batteri flagellati.

(d) Colorazione di inclusione:

Questo metodo di colorazione viene eseguito per colorare le inclusioni cellulari di cellule di batteri come granuli di volutina, granuli di glicogeno e granuli di PBH.