Esperimento per eseguire la colorazione di base dei batteri per osservarne forma, dimensioni e disposizione

Cerca di eseguire semplici colorazioni basiche dei batteri, per osservarne la forma, le dimensioni e la disposizione.

Scopo:

Non è possibile osservare la forma naturale, le dimensioni e la disposizione dei batteri mediante colorazione basica, poiché queste caratteristiche sono distorte dalla fissazione del calore.

Inoltre, alcuni batteri (ad esempio spirilli) sono difficili da colorare.

Pertanto, la colorazione negativa viene eseguita per due ragioni come segue:

(un) Per osservare la forma naturale, le dimensioni e la disposizione dei batteri, poiché qui non viene effettuata alcuna fissazione del calore.

(B) Per osservare quei batteri, che sono difficili da macchiare?

Principio:

Le cellule di batteri trasportano una carica negativa sulla loro superficie, a causa della quale sono circondate da cationi, come Na ⁺ e K ⁺ (Figura 5.9). Nella colorazione acida, si usa una macchia acida, che ionizza in un cromogeno anionico (ione di colorante caricato negativamente) e un catione.

I cromogeni carichi negativamente sono respinti dalle cariche superficiali negative sulle cellule dei batteri, a causa delle quali il colorante non può penetrare nella cellula. Ora, le celle non colorate sono facilmente distinguibili dallo sfondo colorato.

Materiali richiesti:

Diapositive, cappio, macchia acida (eosina / nigrosina), coltura di batteri / micropiastre, microscopio, olio per immersione.

Procedura:

1. Un vetrino viene pulito correttamente sotto l'acqua del rubinetto, in modo che l'acqua non rimanga come gocce sulla sua superficie (Figura 5.10).

2. L'acqua aderente viene eliminata con carta bibula e il vetrino viene asciugato all'aria.

3. Una piccola goccia della macchia acida (nigrosina / eosina) viene posta vicino a un'estremità del vetrino.

4. Un ciclo è sterilizzato su fiamma e raffreddato. In modo asettico, un anello di batteri da una piastra di agar o inclinazione o un ciclo di sospensione di batteri da un brodo liquido viene trasferito alla goccia di macchia. Una sospensione dei batteri nella macchia è fatta mescolando delicatamente il ciclo dei batteri nella goccia di macchia, in modo tale che la goccia non si diffonda.

5. Un'altra diapositiva pulita viene mantenuta ad un angolo di 30 ° rispetto alla prima diapositiva, in modo tale che un bordo stretto della prima tocchi la superficie della successiva verso la fine senza la goccia di macchie.

6. In quella posizione inclinata, la seconda diapositiva viene tirata in avanti verso la goccia di macchie, fino a quando il suo bordo tocca appena la goccia e la goccia si diffonde lungo il suo bordo.

7. In questa posizione inclinata, il secondo vetrino viene spinto all'indietro per formare un sottile striscio di batteri.

8. La macchia è asciugata all'aria. La fissazione del calore non è fatta qui.

9. Il vetrino viene agganciato allo stadio del microscopio e lo striscio osservato sotto obiettivi a bassa potenza e alto secco.

10. Una goccia di olio per immersione viene applicata allo striscio.

11. Lo striscio è osservato sotto l'obiettivo di immersione dell'olio.