Test dell'idrogeno fornito sui batteri per scoprire la loro capacità di produrre idrogeno (con figura)

Leggi questo articolo per conoscere il test dell'idrogeno fornito sui batteri per scoprire la loro capacità di produrre idrogeno!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di ridurre lo zolfo all'idrogeno solforato. È un gas incolore, che reagisce con il ferro (sali ferrosi) per produrre precipitati neri di solfuro ferroso.

Inoltre reagisce con l'acetato di piombo per produrre precipitati neri di solfuro di piombo. Il test dell'idrogeno solforato (test H, S) può essere eseguito in due modi, in base alla fonte di zolfo.

Sono come segue:

(io) Test H 2 S utilizzando una fonte di zolfo inorganica

(Ii) Test H 2 S utilizzando una fonte organica di zolfo

(i) Test H 2 S utilizzando la fonte di zolfo inorganica:

In questo test, i batteri test vengono coltivati ​​su slarghi di agar di ferro triplo zucchero (slants agar TSI), che contengono glucosio, saccarosio, lattosio, rosso fenolo, tiosolfato di sodio e solfato ferroso. Se il batterio utilizza lo zolfo inorganico (tiosolfato di sodio) utilizzato nel terreno, si produce H 2 S, che si combina con il solfato ferroso nel terreno per formare precipitati neri di solfuro ferroso, determinando una variazione nel colore del fondo nero .

Oltre all'utilizzo di zolfo inorganico, se i batteri possono utilizzare uno qualsiasi dei tre zuccheri (glucosio, saccarosio o lattosio), viene prodotto acido che riduce il pH del terreno. Di conseguenza, il colore dello slant cambia da rosso a giallo.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ago da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, colonie isolate di agar di ferro triplo zucchero (agar TSI) o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del mezzo di agar STATO (contenente i 3 zuccheri e il ferro come componenti principali) o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del mezzo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml mediante agitazione e vortice (Figura 7.13).

2. Il suo pH viene determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 4 usando HCl 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore.

3. Il pallone viene riscaldato per sciogliere completamente l'agar nel terreno.

4. Prima che si solidifichi, il terreno in condizioni di fusione fusa viene distribuito in 5 provette (circa 20 ml ciascuna).

5. Le provette sono tappate in cotone, coperte con carta artigianale e legate con filo o elastico.

6. Sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

7. Dopo la sterilizzazione, vengono rimossi dall'autoclave e mantenuti in una posizione inclinata per raffreddare e solidificare il terreno, in modo da ottenere slant in agar TSI.

8. I batteri da testare vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, negli slant, penetrando nel calcio e strisciando sulla superficie degli slant con l'aiuto di un ago sterilizzato a fiamma. L'ago viene sterilizzato dopo ogni inoculazione.

9. Gli slant inoculati vengono incubati a 37 ° C per 24 ore in un incubatore.

osservazioni:

1. Il colore del calcio cambia in nero: H 2 S positivo.

2. Il colore del calcio non cambia in nero: H 2 S negativo.

(ii) Test di H 2 S utilizzando la fonte organica di zolfo

In questo test, i batteri test vengono coltivati ​​in brodo di cisteina, che contiene cisteina come fonte organica di zolfo. Se il batterio utilizza lo zolfo organico (cisteina) usato nel terreno con l'aiuto del suo enzima "cisteina desulphurase", si produce H 2 S. Questo H 2 S si combina con l'acetato di piombo imbevuto in una carta per formare precipitati neri di solfuro di piombo con conseguente cambiamento del colore della striscia di carta in nero.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, brodo di cisteina, strisce di carta da filtro Whatman, soluzione di acetato di piombo (saturo), colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del terreno in brodo di cisteina (contenente la cisteina come componente principale) o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del brodo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml agitandoli e agitandoli ( Figura 7.14).

2. Il suo pH viene determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 5 usando HC1 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore. Il pallone viene riscaldato, se necessario, per sciogliere completamente gli ingredienti.

3. Il brodo viene distribuito in cinque provette (circa 10 ml ciascuna), con tappo di cotone, coperto con carta artigianale e legato con filo o nastro di gomma.

4. I tubi di brodo sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

5. I tubi di brodo sono lasciati raffreddare a temperatura ambiente.

6. I batteri test vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, nel brodo con l'aiuto di un ciclo di inoculo sterilizzato su fiamma bunsen. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

7. Una piccola striscia di carta imbevuta di soluzione di acetato di piombo (saturo) viene fissata alla bocca di ciascuna provetta in modo tale che una lunga porzione rimanga all'interno della provetta e una piccola porzione rimanga all'esterno.

8. Le provette di brodo inoculato vengono incubate a 37 ° C per 48 ore in un incubatore.

osservazioni:

1. Il colore della striscia di acetato di piombo diventa nero: H 2 S positivo.

2. Il colore della striscia di acetato di piombo non cambia in nero: H 2 S negativo.