Test di riduzione dei nitrati sui batteri per scoprire la capacità di ridurre i nitrati

Leggi questo articolo per conoscere le prestazioni del test di riduzione dei nitrati sui batteri per scoprire la loro capacità di ridurre i nitrati!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di ridurre i nitrati, in quanto possono produrre l'enzima 'nitrato reduttasi'.

Questo enzima, in presenza di un adeguato donatore di elettroni, riduce i nitrati (N0 ₃ ^- ) ai nitriti (N0 ₂ ^- ). La presenza di N0 ₂ ^- è indicata da acido sulfanilico e a-naftilamina, che cambiano il colore in rosso.

Nel test di riduzione del nitrato, i batteri test vengono fatti crescere in un mezzo di brodo contenente nitrato (N0 ₃ ^- ). Se i batteri hanno la capacità di ridurre i nitrati, il brodo acquisisce un colore rosso dopo l'aggiunta di acido sulfanilico e a-naftilammina.

Se il colore rosso non viene prodotto, indica che N0 ₃ ^- non è affatto ridotto dai batteri o che i batteri producono enzimi di nitrato riduttasi altamente potenti, che riducono rapidamente N0 ₃ ^- oltre N0 ₂ ^- a NH ₃ e N ₂ . A conferma di ciò, viene aggiunta una piccola quantità di polvere di zinco, che riduce NO ₃, se disponibile nel mezzo, a N0 ₂, producendo in tal modo colore rosso.

Pertanto, se viene prodotto il colore rosso, indica che N0 ₃ è presente nel mezzo invariato e che i batteri non hanno la capacità di ridurre i nitrati. Se il colore rosso non viene prodotto, indica che, il N0 ₃ ^- è stato ridotto oltre N0 ₂ ^- a NH ₃ e N ₂ e che i batteri hanno la capacità di ridurre i nitrati.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, brodo nitrico, polvere di zinco, reagente nitrato Soluzione A, reagente nitrato Soluzione B, colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del terreno di brodo nitrato (contenente il nitrato come componente principale) o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del brodo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml agitandoli e agitandoli ( Figura 7.10).

2. Il suo pH viene determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 2 usando HC1 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore. Il pallone viene riscaldato, se necessario, per sciogliere completamente gli ingredienti.

3. Il brodo viene distribuito in cinque provette (circa 10 ml ciascuna), con tappo di cotone, coperto con carta artigianale e legato con filo o nastro di gomma.

4. I tubi di brodo sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

5. I tubi di brodo sono lasciati raffreddare a temperatura ambiente.

6. I batteri test vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, nel brodo con l'aiuto di un ciclo di inoculo sterilizzato su fiamma bunsen. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

7. Le provette di brodo inoculato vengono incubate a 37 ° C per 48 ore in un incubatore.

8. 0, 5 ml di reagente di nitrato Soluzione A (contenente acido sulfanilico) e reagente di nitrato Soluzione B (contenente a-naftilamina) vengono aggiunti in ciascuna provetta, agitati bene e il cambiamento di colore viene osservato dopo 15 minuti.