Test di fermentazione ossidativa sui batteri per scoprire la loro capacità di utilizzare il glucosio (con la figura)

Test di ossidazione-fermentazione sui batteri per scoprire la loro capacità di utilizzare il glucosio in modo aerobico (ossidativo) o anaerobico (fermentativo)!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di utilizzare il glucosio. Alcuni di essi lo utilizzano solo in presenza di ossigeno (ossido di bue o aerobicamente), mentre gli altri, oltre a utilizzare aerobicamente, possono anche utilizzarlo in assenza di ossigeno (fermentativo o anaerobico).

Quindi, un batterio in grado di fermentare il glucosio deve essere in grado di ossidarlo, ma un batterio in grado di ossidare il glucosio potrebbe non fermentarlo. Se il glucosio viene utilizzato in entrambi i modi, si produce acido, che riduce il pH cambiando il colore del bromocresolo viola da viola a giallo.

Nel test di ossidazione-fermentazione (test O / F), i batteri test vengono cresciuti in modo aerobico e anaerobico separatamente, in tubi di agar semisolidi contenenti glucosio e bromocresolo porpora. Se i batteri hanno la capacità di utilizzare il glucosio, il colore del mezzo cambia da viola a giallo. Se utilizza glucosio aerobicamente, è ossidativo e se utilizza il glucosio anaerobicamente, è fermentativo.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, brodo di glucosio Hugh-Leif-son, paraffina liquida, colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del mezzo di brodo di glucosio Hugh-Leifson (HLGB) (contenente glucosio e bromocresolo porpora come componenti principali) o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del brodo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in un Matraccio conico da 250 ml agitando e facendo roteare (Figura 7.9).

2. Il suo pH viene determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 4 usando HCl 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore.

3. Dopo aver regolato il pH, viene aggiunto agar. Meno agar viene usato qui per ottenere un mezzo semisolido, in modo da facilitare la pugnalata.

4. Il pallone viene riscaldato per sciogliere completamente l'agar nel terreno.

5. Prima che si solidifichi, il terreno in condizioni di fuso caldo viene distribuito in due set di provette (circa 5 ml ciascuna); ogni set con cinque provette.

6. Le provette sono tappate in cotone, coperte con carta artigianale e legate con filo o elastico.

7. I tubi di brodo sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

8. I tubi di brodo sono lasciati raffreddare a temperatura ambiente.

9. La paraffina liquida viene sterilizzata riscaldando a 180 ° C per 3 ore in un forno ad aria calda.

10. I batteri di prova vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, in tutte le provette sterilizzate di brodo semisolidico mediante stabilizzazione con l'ausilio di un cappio di inoculo sterilizzato a fiamma. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

11. La paraffina liquida sterilizzata viene delicatamente versata in modo asettico in una serie di provette inoculate (alte circa 1 cm sul mezzo) per fornire condizioni anaerobiche.

12. Tutte le provette di brodo inoculato vengono incubate a 37 ° C per 24 ore in un incubatore.