Phenylalanine Deaminize Test sui batteri per scoprire la loro capacità di deaminare l'amminoacido (con figura)

Leggi questo articolo per conoscere la fenilalanina deaminize test sui batteri per scoprire la loro capacità di deaminare l'amminoacido!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di deaminare l'amminoacido fenilalanina, in quanto possono produrre l'enzima 'fenilalanina deaminasi'.

Questo enzima deamina la fenilalanina rimuovendo il suo gruppo amminico, producendo in tal modo acido fenilpiruvico (un acido cheto) e ammoniaca (NH ₃ ). L'acido fenilpiruvico forma il colore verde con la soluzione di cloruro ferrico.

Nel test della fenilalanina deaminasi, il batterio del test viene coltivato su slant agar contenenti fenilalanina. Se i batteri hanno la capacità di deamminare la fenilalanina, il colore degli slanti cambia da giallo a verde, dopo aver lasciato cadere la soluzione di cloruro ferrico su di esso.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, agar fenilalanina, soluzione di cloruro ferrico (10%), colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del terreno di agar fenilalanina (contenente fenilalanina come componenti principali) o la sua polvere pronta per l'uso richiesta per 100 ml del terreno vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml agitandoli e agitandoli ( Figura 7.17).

2. Il suo pH viene determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 2 usando HC1 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore.

3. Il pallone viene riscaldato per sciogliere completamente l'agar nel terreno.

4. Prima che si solidifichi, il terreno in condizioni di fusione fusa viene distribuito in 5 provette (circa 20 ml ciascuna).

5. Le provette sono tappate in cotone, coperte con carta artigianale e legate con filo o elastico.

6. Sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

7. Dopo la sterilizzazione, vengono rimossi dall'autoclave e mantenuti in una posizione inclinata per raffreddare e solidificare il terreno, in modo da ottenere degli slanti di agar fenilalanina.

8. I batteri da testare vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, strisciando sulla superficie degli slant con l'aiuto di un'ansa ignifuga. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

9. Gli slant inoculati vengono incubati a 37 ° C per 24-48 ore in un incubatore.

10. A ogni inclinazione si aggiungono 4-5 gocce di soluzione di cloruro ferrico (10%).