Preparazione di Wet Mount of Bacteria per osservarne la forma e le dimensioni naturali

Mirare a preparare il supporto bagnato di un batterio, per osservarne la forma naturale, le dimensioni e la disposizione in condizioni di vita.

Scopo:

Le cellule di batteri possono essere viste facilmente e chiaramente, se colorate da macchie, ma nella maggior parte dei processi di colorazione, le cellule muoiono e perdono la loro forma e dimensione naturali dovute alla fissazione del calore e all'esposizione a sostanze chimiche (macchie, acido e alcool).

Lo scopo di questo esperimento è osservare la forma naturale, le dimensioni e la disposizione dei batteri in condizioni di vita. La motilità non può essere osservata nel supporto bagnato, poiché le celle vengono premute tra il vetrino e il vetrino coprioggetto.

Principio:

Nel supporto bagnato, una goccia della sospensione di batteri viene posta su un vetrino, coperta con un vetrino coprioggetto e osservata sotto un microscopio composto o preferibilmente sotto un microscopio a campo scuro o a contrasto di fase usando un obiettivo a immersione in olio.

Materiali richiesti:

Vetrino, vetrino coprioggetto, vaselina, olio per immersione (olio di lana di cedro o paraffina liquida), coltura batterica (su terreno solido o in sospensione liquida), loop e microscopio (composto, campo scuro o contrasto di fase).

Procedura:

1. Un vetrino viene pulito correttamente sotto l'acqua del rubinetto, in modo che l'acqua non rimanga come gocce sulla sua superficie (Figura 5.2).

2. Il vetrino viene asciugato strofinando con carta bibula e successivamente spostando la fiamma o tenendo al sole.

3. Se i batteri sono stati coltivati su un terreno solido (come coltura inclinata o coltura di piastre), una goccia di acqua distillata viene posta al centro del vetrino. Un ciclo viene sterilizzato scaldandolo su una fiamma per diventare incandescente. Si raffredda a temperatura ambiente. Quindi, in modo asettico, una piccola porzione di coltura di batteri viene raschiata dal circuito e trasferita nella goccia d'acqua.

Una sospensione di batteri viene fatta mescolando delicatamente il ciclo dei batteri nella goccia d'acqua, in modo tale che la goccia non si diffonda. Se cresciuto in un mezzo liquido come sospensione, in modo asettico una goccia della sospensione di batteri viene posta direttamente al centro del vetrino, utilizzando un occhiello sterilizzato con fiamma.

4. La gelatina di petrolio o materiale simile viene applicata intorno alla goccia, in modo che, quando la copertura scivola sulla goccia, l'evaporazione e l'effetto della corrente d'aria siano ridotti al minimo.

5. Un vetrino coprioggetto viene tenuto in una posizione obliqua vicino alla caduta della sospensione di batteri con un lato che tocca il vetrino.

6. Lentamente il vetrino coprioggetto si abbassa, fino a toccare la superficie della goccia.

7. Quindi, il vetrino coprioggetto viene rilasciato, in modo che la goccia di sospensione batterica si diffonda in tutte le direzioni sotto il vetrino coprioggetti. Bisogna fare attenzione, in modo che nessuna bolla d'aria si formi nella sospensione.

8. La diapositiva viene agganciata sul palco di un microscopio composto e osservata usando obiettivi a bassa potenza e ad alto secco. Quindi, una goccia di olio per immersione viene applicata sul vetrino coprioggetto e osservata con l'obiettivo di immersione ad olio del microscopio. Preferibilmente, un microscopio a contrasto di fase o di campo scuro dovrebbe essere usato per una chiara osservazione.