Test di idrolisi dell'amido sui batteri per scoprire la loro capacità di idrolizzare l'amido

Test di idrolisi dell'amido sui batteri per scoprire la loro capacità di idrolizzare l'amido!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di idrolizzare l'amido, in quanto possono produrre l'enzima saccarolitico.

Mentre l'amido si colora di colore blu scuro con iodio, i suoi prodotti finali idrolizzati non acquisiscono tale colore blu scuro con lo iodio.

Nel test di idrolisi dell'amido, i batteri test vengono fatti crescere su piastre di agar contenenti amido. Dopo che le colonie dei batteri sono visibili, le piastre sono inondate di soluzione di iodio. Se i batteri hanno la capacità di idrolizzare l'amido, le sue colonie idrolizzano l'amido nel terreno nelle aree circostanti, mentre il resto delle aree contiene amido non idrolizzato.

Di conseguenza, allagando la soluzione di iodio, intorno alle colonie si formano zone trasparenti trasparenti, poiché i prodotti idrolizzati formati attorno a loro non formano il colore blu scuro con lo iodio. D'altra parte, il resto delle aree delle placche diventa blu scuro, poiché lo iodio forma un colore blu scuro con l'amido non idrolizzato in queste aree.

Materiali richiesti:

Piastre di Petri, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, agar di amido, soluzione di iodio Lugol, colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Due piatti di Petri vengono puliti, coperti con carta artigianale e legati con filo o elastico (Figura 7.21). Questo passaggio e la sterilizzazione delle piastre di Petri al punto 6 sono omesse, se le piastre di Petri sterilizzate a forno sono utilizzate direttamente.

2. Gli ingredienti del terreno di amido di amido (contenente l'amido come componente principale) o la sua polvere pronta per l'uso richiesta per 100 ml del mezzo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml agitandoli e agitandoli.

3. Il suo pH è determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 2 usando HCI 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore.

4. Il pallone viene riscaldato per sciogliere completamente l'agar nel terreno.

5. Il matraccio è tappato in cotone, coperto con carta artigianale e legato con filo o elastico.

6. Le due capsule di Petri e il matraccio conico contenente terreno di amido di amido vengono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

7. Dopo la sterilizzazione, vengono rimossi dall'autoclave e lasciati raffreddare per un po 'di tempo, senza consentire al terreno di solidificarsi. Il raffreddamento del mezzo impedisce la formazione di condensa e l'accumulo di gocce d'acqua all'interno delle piastre. Se il terreno è già stato preparato e solidificato durante lo stoccaggio, deve essere liquefatto riscaldando accuratamente finché non si scioglie completamente.

8. Per preparare le piastre di amido di agar, prima che l'agar sterilizzato si raffreddi e si solidifichi, in condizioni di fuso caldo, viene versato in modo asettico, preferibilmente all'interno di una camera a flusso laminare, nelle due piastre di Petri sterilizzate (circa 20 ml ciascuna), in modo che il mezzo fuso copre completamente il fondo delle piastre di Petri.

Quindi, le piastre sono coperte con i loro coperchi e lasciate raffreddare, in modo da solidificare il mezzo in esse. Il vapore acqueo che può condensare sulla superficie interna delle piastre e dei coperchi viene evaporato mantenendo le piastre e i coperchi in una posizione invertita in un incubatore a 37 ° C per circa 1 ora.

9. Ogni piatto è segnato sul lato inferiore in quattro quarti.

10. L'inoculazione spot dei batteri di prova viene eseguita in modo asettico, preferibilmente all'interno di una camera a flusso laminare, al centro di ogni quarto facendo uno spot (o piccolo striscio) dei batteri con l'aiuto di un'ansa ignifuga. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

11. Le piastre inoculate vengono incubate in posizione capovolta, dall'alto verso il basso, a 37 ° C per 24-48 ore in un incubatore fino a quando le colonie dei batteri sono visibili.

12. Le piastre sono allagate con la soluzione di iodio di Lugol.