Note di studio sulla citometria a flusso avanzato
L'articolo sotto riportato fornisce note di studio sulla citometria a flusso anticipato.
La citometria a flusso è la recente tecnica sviluppata negli ultimi due decenni per studiare il contenuto cellulare, in particolare l'efficienza dell'imballaggio nucleare. Oltre all'NPE, le caratteristiche fisiche e chimiche dei contenuti delle varie cellule e condizioni patologiche potrebbero essere analizzate rapidamente con una conclusione corretta.
I citometri a flusso sono disponibili sul mercato sotto forma di una macchina. La macchina è costituita da un sistema di fluido, un sistema ottico per raccogliere i segnali luminosi generati come celle che passano attraverso il laser. La macchina è inoltre dotata di un sistema elettronico che converte i segnali luminosi in segnali elettronici proporzionali che vengono infine digitalizzati per l'analisi del computer.
Circa 5000 cellule al secondo, misurate singolarmente una dopo l'altra, dalla sospensione di una popolazione eterogenea potrebbero essere scansionate.
Il sofisticato sistema Fludics progettato è dotato di laser, ottica, elettronica e smistamento. Il sistema Fludics ha il selezionatore di cellule attivate con fluorescenza (sistema di fluidi Calibur FACS), durante l'ordinamento è in grado di ordinare la precisione del conteggio delle singole cellule.
Il risultato è un'elevata purezza con recupero che cade tra Single cell e Recovery. Ha il controllo elettronico con tre pulsanti per selezionare la modalità operativa PRIME, STAND BY e RUN. Il tasso è controllato come alto; (60ul / min.), Medio (35 ul / min) e Basso (12 ul / min).
L'eccitazione e l'emissione, i fluorocromi, i filtri e la compensazione del colore sono la parte importante dell'attrezzatura. Il filtro BP 530/30 misura i segnali emessi dall'isotocianato di fluorescenza (colorazione). Se si utilizza la Ficoeritrina e il Popidio Ioduro, viene utilizzato il filtro BP 585/42. 650 filtri LP vengono utilizzati se vengono generati Peridinina clorofilla e 7-Amino-Actinomicina D Signal.
I segnali laser vengono letti dal software di ricerca cellulare Becton Dickinson. Il rivelatore fluorescente e i filtri a banda devono essere regolati secondo le istruzioni e le esigenze dello strumento. Le sorgenti di luce laser Argon da 488 nm e il filtro passa-banda da 623 nm sono comunemente presenti nell'attrezzatura.
Ha anche un sistema per visualizzare dati e analisi. I parametri importanti sono gli istogrammi, i dati multiparametrici e i dati e il gating della modalità elenco. L'analisi della macchina dei dati con l'aiuto del software fornito e fornisce istogrammi del contenuto del DNA rispetto al conteggio che vengono visualizzati automaticamente sul computer (49.2).
Le applicazioni del citometro a flusso sono numerose e sono un vantaggio per la ricerca biologica e per le indagini cliniche in molte malattie umane. Il citometro a flusso è utilizzato per lo studio dei lignaggi ematici nel tessuto emopoietico nelle cellule renali della testa dei pesci che respirano aria.
Può essere facile distinguere tra la cellula staminale ematopoietica pluripotente e il fenotipo della popolazione di linfociti periferici funzionali e maturi. L'uso significativo di questa apparecchiatura è di studiare l'apoptosi o la morte cellulare e anche di studiare la necrosi cellulare a causa della tossicità dei pesticidi.
A causa dei segnali di dispersione grandangolare è possibile risolvere linfociti, monociti e granulociti da campioni di sangue intero lisato. È anche possibile separare le piastrine dal rumore di fondo. È usato per il sistema immunitario e in immunofenotipizzazione. È usato per studiare la leucemia e il linfoma, la ricerca sui trapianti, il conteggio dei reticolociti e l'analisi dei contenuti cellulari del DNA.
A causa del meccanismo di elaborazione degli impulsi, è vantaggioso nell'analisi del ciclo cellulare del DNA. L'analisi NPE viene utilizzata per differenziare il carcinoma mammario primario e le metastasi, il carcinoma del colon primario e le metastasi del colon nonché il cancro gastrico e ovarico (Fig. 49.2).
Il protocollo utilizzato è che le prime cellule sono state rimosse e fissate in paraformaldeide al 3%. Sono permeabilizzati con Triton x 100 allo 0, 5%. Il DNA nucleare è stato quindi etichettato con ioduro di popidio dopo il trattamento con RNasi utilizzando il kit DNA Test ciclo Plus.
