Triplo test del ferro da zucchero sui batteri per scoprire la capacità di produrre solfuro di idrogeno (con figura)

Leggi questo articolo per saperne di più sul test del triplo zucchero al ferro sui batteri per scoprire la capacità di produrre solfuro di idrogeno!

Mirare a eseguire il triplo test del ferro da zucchero (TSI test), per scoprire la capacità di un batterio di utilizzare uno o più dei tre zuccheri, come glucosio, saccarosio e lattosio, nonché la sua capacità di produrre idrogeno solforato (H 2 S), che riduce il ferro.

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di utilizzare uno o più dei tre zuccheri come glucosio, saccarosio e lattosio.

Se viene utilizzato uno o più dei tre zuccheri (triplo zucchero), viene prodotto acido, che riduce il pH cambiando il colore del rosso fenolo dal rosso al giallo.

Inoltre, alcuni batteri hanno la capacità di produrre idrogeno solforato (H 2 S) utilizzando composti solforati. L'H 2 S così prodotto si combina con il composto di ferro, solfato ferroso, per formare precipitati neri di solfuro ferroso.

Nel test del triplo zucchero di ferro (test TSI), i batteri test vengono coltivati ​​su slarghi agar contenenti glucosio, saccarosio, lattosio, rosso fenolo, tiosolfato di sodio e solfato ferroso. Mentre il mezzo contiene glucosio (cioè D-glucosio o destrosio) a una bassa concentrazione dello 0, 1%, la concentrazione di saccarosio e lattosio è mantenuta alta all'1%.

Se i batteri hanno la capacità di utilizzare uno o più dei tre zuccheri, il colore del mezzo cambia da rosso a giallo. Se i batteri hanno la capacità di produrre H 2 S, il terreno acquista un colore nero. Poiché nel terreno sono utilizzati tre zuccheri e un composto di ferro, il test si chiama test del triplo zucchero di ferro.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ago da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, agar triplo zucchero ferro (TSI), colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del mezzo di agar STATO (contenente i 3 zuccheri e il ferro come componenti principali) o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del mezzo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml mediante agitazione e vortice (Figura 7.7).

2. Il suo pH viene determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 4 usando HCl 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore.

3. Il pallone viene riscaldato per sciogliere completamente l'agar nel terreno.

4. Prima che si solidifichi, il terreno in condizioni di fusione fusa viene distribuito in 5 provette (circa 20 ml ciascuna).

5. Le provette sono tappate in cotone, coperte con carta artigianale e legate con filo o elastico.

6. Sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

7. Dopo la sterilizzazione, vengono rimossi dall'autoclave e mantenuti in una posizione inclinata per raffreddare e solidificare il terreno, in modo da ottenere slant in agar TSI.

8. I batteri da testare vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, negli slant, penetrando nel calcio e strisciando sulla superficie degli slant con l'aiuto di un ago sterilizzato a fiamma. L'ago viene sterilizzato dopo ogni inoculazione.

9. Gli slant inoculati vengono incubati a 37 ° C per 24 ore in un incubatore.

osservazioni:

1. Culo giallo e inclinazione rossa con o senza produzione di gas (si rompe nel culo di agar):

Si è formato il calcio acido e l'inclinazione alcalina. Qui solo il glucosio è stato usato in modo anaerobico (fermentativo) rendendo il calcio acido (giallo). Nessun altro zucchero è stato utilizzato. Poiché la concentrazione di glucosio è inferiore (0, 1%), la piccola quantità di acido prodotta sulla superficie inclinata viene ossidata rapidamente rendendola alcalina (rossa).

Inoltre, la dominazione ossidativa del peptone presente nel terreno produce NH Y che rende il pungente alcalino (rosso). Tuttavia, nel calcio, la condizione acida viene mantenuta a causa della ridotta disponibilità di ossigeno e della crescita più lenta dei batteri. Pertanto, i batteri sono glucosio positivi.

2. Culo giallo e inclinazione gialla con o senza produzione di gas:

Il culo acido e l'inclinazione acida sono stati formati. Qui, il lattosio e / o il saccarosio sono stati fermentati. Poiché la loro concentrazione nel mezzo è elevata, producono una grande quantità di acidi con conseguente inclinazione acida e calcio acido e mantenere la condizione acida. Pertanto, i batteri sono saccarosio / lattosio positivi.

3. Culo rosso e inclinazione rossa:

Nessuno dei tre zuccheri è stato fermentato. Invece, i peptoni sono stati catabolizzati in condizioni anaerobiche e / o aerobiche, causando una condizione alcalina dovuta alla produzione di ammoniaca.

Se si verifica solo la degradazione aerobica dei peptoni, solo la superficie inclinata diventa alcalina (rossa). Se c'è una degradazione aerobica e anaerobica del peptone, sia l'inclinazione che il calcio diventano alcalini (rossi). Pertanto, i batteri sono negativi allo zucchero.

4. Annerimento del culo:

Oltre a una qualsiasi delle suddette condizioni, se si verifica l'annerimento del calcio, indica che i batteri sono in grado di produrre H 2 S utilizzando lo zolfo inorganico (tiosolfato di sodio) presente nel terreno.

L'H 2 S si combina con il solfato ferroso nel mezzo per formare precipitati neri di solfuro ferroso con conseguente variazione del colore del mezzo al nero. Quindi, i batteri sono H 2 S positivi.

5. Nessun annerimento del sedere:

I batteri non sono in grado di produrre H 2 S utilizzando lo zolfo inorganico (tiosolfato di sodio) presente nel terreno. Pertanto, i batteri sono negativi per H 2 S.