Voges-Proskauer Esperimento sui batteri per trovare la loro capacità di utilizzare il glucosio (con figura)

Leggi questo articolo per conoscere il test Voges-Proskauer (test VP) sui batteri per scoprire la loro capacità di utilizzare il glucosio con la produzione di acetilmetilcarbinolo!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di utilizzare il glucosio e convertirlo in acetilmetilcarbinolo (acetoina), che è un prodotto finale neutro.

Questi batteri inizialmente metabolizzano il glucosio in acido piruvico, che viene ulteriormente metabolizzato attraverso l'acido metabolico intermedio acetico ad acetilmetilcarbinolo (acetoina) e C0 ₂ attraverso la "via del butilene glicole".

L'acetilmetilcarbinolo è ossidato a diacetile in presenza di a-naftolo in condizioni alcaline (40% KOH). Il diacetile reagisce con il gruppo di guanidina di creatina (dal peptone utilizzato nel terreno di coltura) per produrre un colore rosa rosato.

Nel test Voges-Proskauer (test VP), i batteri test vengono coltivati in un mezzo di brodo contenente glucosio. Se i batteri hanno la capacità di utilizzare il glucosio con produzione di acetilmetilcarbinolo (acetoina) come prodotto finale neutro, il brodo acquisisce un colore rosa rosato con aggiunta di soluzione di naftolo seguita da 40% KOH.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, brodo MR-VP (o brodo di glucosio fosfato), soluzione VP I (soluzione reagente Barritt A) e VP soluzione II (Soluzione di reagente B di Barritt), colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del mezzo di brodo MR-VP (contenente il glucosio come componente principale) o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del brodo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml agitando e vorticoso (Figura 7.5). Qui è anche possibile utilizzare il brodo usato per il test del metile rosso. Di solito lo stesso brodo viene utilizzato per entrambi i test (MR e VP) contemporaneamente.

2. Il suo pH è determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 6, 9 usando HCI 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore. Il pallone viene riscaldato, se necessario, per sciogliere completamente gli ingredienti.

3. Il brodo viene distribuito in cinque provette (circa 10 ml ciascuna), con tappo di cotone, coperto con carta artigianale e legato con filo o nastro di gomma.

4. I tubi di brodo sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

5. I tubi di brodo sono lasciati raffreddare a temperatura ambiente.

6. I batteri test vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, nel brodo con l'aiuto di un ciclo di inoculo sterilizzato su fiamma bunsen. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

7. Le provette di brodo inoculato vengono incubate a 37 ° C per 48-72 ore in un incubatore.

8. La soluzione VP I (contenente α-naftolo) viene fatta cadere nelle provette di brodo (0, 2 ml ciascuna) e miscelata accuratamente.

9. La soluzione VP II (contenente KOH) viene fatta cadere nelle provette di brodo (0, 6 ml ciascuna), mescolata accuratamente e lasciata riposare per 30 minuti a 2 ore.