Test di utilizzo del citrato per verificare la capacità di un batterio di utilizzare il citrato come fonte di carbonio

Mirare a eseguire il test di utilizzo del citrato, per scoprire la capacità di un batterio di utilizzare il citrato come unica fonte di carbonio.

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di crescere nei media senza C e N organici.

Possono utilizzare il citrato di sodio come unica fonte di C e ammonio diidrogeno fosfato (NH ₄ H ₂ P0 ₄ ) come unica fonte di N. Essi utilizzano NH ₄ H ₂ P0 ₄ per ottenere N con produzione di NH ₃, che aumenta il pH con conseguente variazione del colore del blu di bromotimolo da verde (pH = 6, 9) a blu (pH superiore a 7, 6).

Nel test di utilizzazione del citrato, i batteri di prova vengono coltivati su inclinazioni agar prive di C o N organica, contenenti invece citrato di sodio, NH ₄ H ₂ P0 ₄ e blu di bromotimolo. Se i batteri hanno la capacità di utilizzare il citrato come unica fonte di C, mostrano una crescita sui pendii. Utilizza anche NH ₄ H ₂ P0 ₄ come unica fonte di N risultante in un cambiamento nel colore degli slant dal verde al blu.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ago da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, agar citrato di Simmons, colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del terreno simmons citrato agar (contenente sodio citrato, NH ₄ H, P0 ₄ e blu di bromotimolo come ingredienti principali) o la sua polvere pronta per l'uso richiesta per 100 ml di terreno vengono pesati e sciolti in 100 ml di distillato in una beuta da 250 ml, scuotere e agitare (Figura 7.6).

2. Il suo pH è determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 6, 9 usando 0, 1 N HC1 se è più o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore.

3. Il pallone viene riscaldato per sciogliere completamente l'agar nel terreno.

4. Prima che si solidifichi, il terreno in condizioni di fusione fusa viene distribuito in 5 provette (circa 20 ml ciascuna).

5. Le provette sono tappate in cotone, coperte con carta artigianale e legate con filo o elastico.

6. Sono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

7. Dopo la sterilizzazione, vengono rimossi dall'autoclave e mantenuti in una posizione inclinata per raffreddare e solidificare il terreno, in modo da ottenere inclinazioni agar citrato.

8. I batteri da testare vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, negli slant, penetrando nel calcio e strisciando sulla superficie degli slant con l'aiuto di un ago sterilizzato a fiamma. L'ago viene sterilizzato dopo ogni inoculazione.

9. Gli slant inoculati vengono incubati a 37 ° C per 24-48 ore in un incubatore.