Esperimento per coltivare il virus animale nell'uovo di pollo embricato (con figura)

Esperimento per coltivare il virus animale nell'uovo di pulcino embrionale!

Principio:

I virus possono crescere solo nei sistemi viventi. Non possono crescere in terreni non viventi come agar nutritivo o brodo nutriente. Pertanto, la loro coltivazione richiede cellule ospiti suscettibili al virus specifico.

Il virus come il batteriofago, che infetta e cresce nelle cellule batteriche, viene coltivato usando colture di cellule batteriche come sistema vivente.

Ad esempio, il colifago virale (un batteriofago) viene coltivato utilizzando la coltura del batterio E. coli. Al contrario, i virus animali, che infettano e crescono nel corpo degli animali, richiedono sistemi animali viventi sensibili.

I tre sistemi animali viventi utilizzati per la coltivazione di virus animali nei laboratori sono i seguenti:

1. Animali sensibili:

In questa tecnica, il virus da coltivare può crescere nel corpo di un animale vivente come il topo o la cavia, che è sensibile a quel virus. Questa tecnica non è più utilizzata essendo stata sostituita dalle seguenti tecniche più recenti, efficienti ed economiche.

2. Cultura del tessuto:

È una tecnica altamente sofisticata. Qui le cellule animali note per essere sensibili al virus da coltivare e che si sa anche moltiplicare rapidamente vengono prima isolate dal tessuto vivente adatto di un animale. Queste cellule sono poste in un recipiente di vetro o di plastica contenente un mezzo nutritivo estremamente ricco. Le cellule si attaccano alla superficie del vaso e continuano a dividersi fino a coprire l'intera superficie con un monostrato confluente di cellule. Questo si chiama cultura dei tessuti.

Quindi, il virus da coltivare viene inoculato nella coltura del tessuto suscettibile. Il virus infetta le cellule viventi della coltura tissutale, sovvertono il loro apparato metabolico e si riproducono rapidamente, crescendo così profusamente nelle cellule.

3. Uova di pollo embrionate:

In questa tecnica semplice ed economica, il virus da coltivare viene iniettato in un uovo pulcino embrionato. Il virus cresce all'interno dell'uovo del pulcino vivente e causa la malattia nell'embrione, manifestata da diversi sintomi della malattia (effetti citopatogeni) specifici per quel virus. La presenza di questi sintomi indica la crescita di quel virus nell'uovo.

Materiali richiesti:

Due uova di pulcino embrionate, dispositivo candling, tintura di iodio, cotone assorbente, alcool al 70%, un trapano piccolo, diluizione 1: 2 del virus di Newcastle, siringa, vasper sterile, soluzione salina sterile, piastre Petri, bruciatore Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto, incubatore.

Procedura:

1. Due uova di pulcino embrionate vengono candite usando un candelabro per dimostrare la vitalità dell'embrione. L'embrione è vitale, se mostra un movimento in risposta al calore dalla luce. Anche le posizioni del sacco ad aria e dei grandi vasi sanguigni sono determinate e marcate sul guscio delle uova durante la candela (Figura 8.7).

2. Il guscio viene disinfettato sopra l'air sac con tintura di iodio e quindi lasciato asciugare. Lo stesso posto viene tamponato con cotone assorbente imbevuto di alcol al 70%.

3. La punta di un piccolo trapano viene sterilizzata immergendo in alcool al 70% e quindi fiammeggiandola.

4. Usando questo trapano, un piccolo foro viene fatto in modo asettico sul guscio sopra il sacco d'aria in una regione lontana dai vasi sanguigni.

5. 0, 2 ml della diluizione 1: 2 del virus di Newcastle vengono iniettati asetticamente nella cavità allantoica di una delle due uova usando una siringa sterilizzata. Questo viene fatto tenendo l'uovo in posizione verticale, inserendo l'ago della siringa attraverso il foro sul guscio fino alla sua impugnatura con un angolo di 45 °, perforando la membrana sacca d'aria e penetrando nella cavità allantoica. Questo uovo inoculato da virus funge da "uovo di prova".

6. Dopo l'inoculazione, l'ago viene ritirato e il foro sul guscio viene sigillato con vasper caldo sterile.

7. Usando la stessa tecnica, 0, 2 ml di soluzione fisiologica sterile vengono inoculati nell'altro uovo pulcino embrionato, che funge da "uovo di controllo".

8. Entrambe le uova vengono incubate a 37 ° C per 3 o 4 giorni in un incubatore con umidità adeguata.

9. Le osservazioni sono annotate ogni giorno.

10. Una volta che la morte è stata determinata, l'embrione viene rimosso dal suo guscio e il contenuto versato in una capsula di Petri e nuovamente osservato.

11. Tutti i materiali contaminati vengono scartati in un becher contenente polvere sbiancante.

osservazioni:

1. Le uova vengono candite ogni giorno durante l'incubazione e osservate per la morte embrionale come evidenziato dalla cessazione del movimento, che di solito si verifica 3-4 giorni dopo l'inoculazione del virus.

2. Una volta determinato il decesso, l'embrione viene rimosso dal guscio e il contenuto viene versato in una capsula di Petri. È osservato per lesioni necrotiche e segni di emorragia.

3. L'uovo di controllo viene esaminato per la prova degli effetti citopatogeni.

4. Le osservazioni sono riportate nella tabella 8.2.