Test di idrolisi lipidica sui batteri per scoprire la loro capacità di idrolizzare i lipidi (con la figura)

Leggi questo articolo per conoscere il test di idrolisi lipidica, per scoprire la capacità di un batterio di idrolizzare i lipidi (grassi)!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di idrolizzare i lipidi (grassi) in glicerolo e acidi grassi, poiché possiedono l'enzima lipolitico "lipasi".

Questi batteri sono chiamati batteri lipolitici. Mentre i lipidi formano un'emulsione, quando erogati in agar, producendo opacità, i loro prodotti finali idrolizzati, glicerolo e acidi grassi, non formano tale emulsione con l'agar, per la quale non producono tale opacità; piuttosto produrre trasparenza.

Nel test di idrolisi lipidica, i batteri test vengono coltivati su piastre di agar contenenti tributirina come substrato lipidico. La tributirina forma un'emulsione, quando erogata nell'agar, produce un mezzo opaco.

Se i batteri hanno la capacità di idrolizzare i lipidi, le sue colonie idrolizzano la tributirina nel terreno nelle aree circostanti al glicerolo e agli acidi grassi solubili (acido butirrico), mentre il resto delle aree contiene tributirina non idrolizzata.

Di conseguenza, intorno alle colonie si formano zone trasparenti chiare, poiché i prodotti idrolizzati, il glicerolo e gli acidi grassi, formati attorno a loro, non formano emulsione con l'agar. D'altra parte, il resto delle aree delle piastre rimane opaco, in quanto il tributirene non idrolizzato in queste aree forma un'emulsione con l'agar.

Materiali richiesti:

Piastre di Petri, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, becco Bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatore, agar tributirino, colonie isolate o colture pure di batteri.

Procedura:

1. Due piatti di Petri vengono puliti, coperti con carta artigianale e legati con filo o elastico (Figura 7.22). Questo passaggio e la sterilizzazione delle piastre di Petri nella fase 6 sono omessi, se le piastre di Petri sterilizzate a forno vengono utilizzate direttamente.

2. Gli ingredienti del terreno di tributyrin agar (esclusa la tributirina, che è il componente lipidico) o la sua polvere pronta per 100 ml del terreno vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml agitando e vorticoso.

3. Il suo pH è determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 7, 2 usando HCI 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore.

4. Il pallone viene riscaldato per sciogliere completamente l'agar nel terreno.

5. Dopo il raffreddamento a circa 90 ° C, la tributirina viene aggiunta ed emulsionata in un miscelatore Warring.

6. Il matraccio è tappato in cotone, coperto con carta artigianale e legato con filo o elastico.

7. Le due capsule di Petri e il matraccio conico contenente terreno di agar tributirolo vengono sterilizzati a 121 ° C (15 psi di pressione) per 15 minuti in un'autoclave.

8. Dopo la sterilizzazione, vengono rimossi dall'autoclave e lasciati raffreddare per un po 'di tempo, senza lasciare solidificare il terreno. Il raffreddamento del mezzo impedisce la formazione di condensa e l'accumulo di gocce d'acqua all'interno delle piastre. Se il terreno è già stato preparato e solidificato durante lo stoccaggio, deve essere liquefatto riscaldando accuratamente finché non si scioglie completamente.

9. Per preparare le piastre di agar tributirolo, prima che il terreno sterilizzato in agar tributirolo si raffreddi e si solidifichi, in condizioni di fuso caldo, viene versato in modo asettico, preferibilmente all'interno di una camera a flusso laminare, nelle due piastre di Petri sterilizzate (circa 20 ml ciascuna), in modo che il mezzo fuso copre completamente il fondo delle piastre di Petri.

Quindi, le piastre sono coperte con i loro coperchi e lasciate raffreddare, in modo da solidificare il mezzo in esse. La tributirina forma un'emulsione, quando erogata in agar, produce un mezzo opaco. Il vapore acqueo che può condensare sulla superficie interna delle piastre e dei coperchi viene evaporato mantenendo le piastre e i coperchi in posizione capovolta in un incubatore a 37 ° C per circa 1 ora.

10. Ogni piatto è segnato sul lato inferiore in quattro quarti.

11. L'inoculazione spot dei batteri test viene eseguita in modo asettico, preferibilmente all'interno di una camera a flusso laminare, al centro di ogni quarto facendo uno spot (o piccolo striscio) dei batteri con l'aiuto di un'ansa ignifuga. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

12. Le piastre inoculate vengono incubate in posizione capovolta, dall'alto verso il basso, a 37 ° C per 24-48 ore in un incubatore fino a quando sono visibili colonie dei batteri.