Litmus Milk Test sui batteri per scoprire la loro capacità di trasformare i componenti del latte in prodotti finali

Litmus Milk Test sui batteri per scoprire la loro capacità di trasformare i componenti del latte in prodotti finali!

Principio:

Alcuni batteri hanno la capacità di crescere nel latte e trasformare diverse componenti del latte in vari prodotti finali. Il latte è una miscela complessa di diversi componenti.

I principali componenti in grado di trasformazione da parte dei batteri sono lo zucchero di latte lattosio e le proteine ​​del latte caseina, lacto-albumina e lacto-globulina.

Diversi batteri hanno diversi sistemi enzimatici, grazie ai quali agiscono su diversi componenti e li trasformano in vari prodotti finali metabolici, che sono le caratteristiche dei batteri.

La prova del latte di tornasole viene eseguita per scoprire la capacità di un batterio di trasformare diverse componenti del latte, che si manifesta come cambiamento di colore della tornasole, produzione di gas, formazione di cagliata ecc. Il tornasole è un indicatore di pH e un indicatore di riduzione dell'ossidazione, che cambia colore a seconda delle condizioni del brodo.

Nel test del latte di tornasole, i batteri test vengono coltivati ​​in un mezzo di brodo contenente latte e tornasole. Se i batteri hanno la capacità di trasformare diversi componenti del latte in vari prodotti finiti, crescono nel brodo e trasformano i componenti in modi diversi a seconda dei sistemi enzimatici.

Le sei trasformazioni più importanti, che possono essere osservate nel latte di tornasole a seguito di attività batteriche, sono le seguenti:

(i) fermentazione del lattosio

(ii) formazione di gas

(iii) riduzione del tornasole

(iv) formazione di cagliata

(v) Proteolisi (Peptonizzazione)

(vi) reazione alcalina

(i) fermentazione del lattosio:

I batteri capaci di utilizzare il lattosio come fonte di carbonio per la produzione di energia utilizzano l'enzima inducibile p-galattosidasi e degradano il lattosio in glucosio e galattosio. Il glucosio viene ulteriormente degradato attraverso il percorso Embden-Meyerhof fino all'acido piruvico, che a sua volta viene convertito in acido lattico. L'accumulo di acido lattico riduce il pH del terreno a circa 4, 0, grazie al quale il colore del tornasole cambia da viola a pH neutro a rosa a pH acido.

(ii) Formazione di gas:

I prodotti finali della fermentazione batterica del lattosio possono includere gas come anidride carbonica e idrogeno. La presenza di questi gas può essere vista come separazioni della cagliata o dallo sviluppo di tracce o fessurazioni all'interno della cagliata, mentre i gas salgono verso la superficie.

(iii) Riduzione del tornasole:

La fermentazione è un processo anaerobico che coinvolge l'ossidazione che si verifica in assenza di ossigeno molecolare. L'ossidazione può verificarsi con l'aggiunta di ossigeno o la rimozione di ioni idrogeno. La fermentazione del lattosio, essendo un processo anaerobico, comporta la rimozione dello ione idrogeno da esso.

Poiché lo ione idrogeno non può esistere nello stato libero, deve esserci un accettore di ioni idrogeno. Nella prova del latte di tornasole, il tornasole funge da accettore dello ione idrogeno. La tornasole è viola allo stato ossidato, ma quando accetta l'idrogeno si riduce e diventa bianca o color latte.

(iv) Formazione di cagliata:

Le attività biochimiche di diversi batteri coltivati ​​nel latte di tornasole possono determinare la produzione di due tipi distinti di cagliata (coaguli). La cagliata è indicata come "cagliata acida" o "cagliata cagliata" a seconda del meccanismo biochimico responsabile della sua formazione.

In caso di cagliata acida, acido lattico o altri acidi organici, in presenza di ioni calcio, causano la precipitazione della proteina del latte, la caseina come caseinato di calcio per formare un coagulo insolubile. Il coagulo è duro e non si ritrae dalla parete della provetta. Una cagliata acida è facilmente identificabile se la provetta è capovolta e il coagulo rimane immobile.

In caso di cagliata caglio, alcuni batteri producono rennin, un enzima che agisce sulla caseina per formare paracaseina, che, in presenza di ioni calcio, viene precipitata come paracaseinato di calcio e forma un coagulo insolubile. A differenza della cagliata acida, questo è un coagulo semisolido che scorre lentamente quando la provetta è inclinata.

(v) Proteolisi (Peptonizzazione):

Alcuni batteri, che non hanno la capacità di ottenere energia dalla fermentazione del lattosio, usano altre fonti nutrizionali come le proteine ​​per questo scopo. Per mezzo di enzimi proteolitici, questi batteri idrolizzano le proteine ​​del latte, principalmente la caseina, ai loro elementi costitutivi fondamentali, cioè gli amminoacidi.

Il tornasole diventa viola intenso nella parte superiore del tubo, mentre il mezzo inizia a perdere il corpo e produce un aspetto simile al siero di latte, traslucido, mentre le proteine ​​vengono idrolizzate in aminoacidi.

(vi) reazione alcalina:

Una reazione alcalina è evidente, quando il colore del mezzo rimane invariato o cambia in blu profondo. Questa reazione è indicativa della degradazione parziale della caseina da parte dei batteri in catene polipeptidiche più corte, con il rilascio simultaneo di prodotti finali alcalini responsabili del cambiamento di colore osservabile.

Materiali richiesti:

Provette, matraccio conico, tappi di cotone, ansa da inoculo, autoclave, bruciatore bunsen, camera a flusso laminare, vasetto di raccolta, incubatrice, brodo di latte di tornasole, colonie isolate o colture di batteri puri.

Procedura:

1. Gli ingredienti del terreno di brodo latte tornasole o la sua polvere pronta per il fabbisogno di 100 ml del brodo vengono pesati e sciolti in 100 ml di acqua distillata in una beuta da 250 ml agitandoli e agitandoli (Figura 7.12).

2. Il suo pH è determinato usando una carta pH o un pH metro e regolato a 6, 8 usando HCI 0, 1 N se è maggiore o usando 0, 1 N NaOH se è inferiore. Il pallone viene riscaldato, se necessario, per sciogliere completamente gli ingredienti.

3. Il brodo viene distribuito in cinque provette (circa 10 ml ciascuna), con tappo di cotone, coperto con carta artigianale e legato con filo o nastro di gomma.

4. I tubi di brodo vengono sterilizzati a 121 ° C per 15 minuti in un'autoclave.

5. I tubi di brodo sono lasciati raffreddare a temperatura ambiente.

6. I batteri test vengono inoculati in modo asettico, preferibilmente in una camera a flusso laminare, nel brodo con l'aiuto di un ciclo di inoculo sterilizzato su fiamma bunsen. Il ciclo è sterilizzato dopo ogni inoculazione.

7. Le provette di brodo inoculato vengono incubate a 37 ° C per 24-48 ore in un incubatore.

osservazioni:

1. Il colore del brodo diventa rosa: fermentazione del lattosio.

2. Il brodo si trasforma in una cagliata solida con fessurazioni: formazione di gas.

3. Il colore del brodo diventa bianco con l'anello viola in alto: riduzione del tornasole.

4. Il brodo si trasforma in cagliata solida bianca con anello viola in cima: formazione di cagliata.

5. Il brodo diventa traslucido bruno-simile al siero con l'anello viola intenso in cima: Proteolisi.

6. Il colore del brodo rimane invariato o cambia in blu intenso: reazione alcalina.