Standardizzazione delle piante medicinali (linee guida dell'OMS)

1. Valutazione botanica:

un. Valutazione sensoriale:

io. Microscopia visiva:

ii. Toccare.

iii. Odore.

iv. Gusto.

b. Affari esteri:

io. Piante straniere

ii. Animali stranieri

iii. Minerali esteri, ecc.

c. Microscopia:

io. Osservazione istologica

ii. Rilevamento istochimico

iii. Misure.

2. Valutazione fisiochimica:

un. Cromatografia su strato sottile.

b. Materia estrattiva

io. Valore estrattivo solubile in acqua calda.

ii. Materia estrattiva di acqua fredda.

iii. Materia estrattiva di etanolo

c. Contenuto di acqua e sostanze volatili:

LOD, azeotropico.

d. Oli volatili:

Per distillazione a vapore.

3. Valutazione farmacologica:

un. Valore di amarezza:

Unità eq. all'amarezza della soluzione standard di cloridrato di chinino

b. Attività emolitica:

Sul sangue di bue in confronto alla saponina di riferimento standard

c. L'astringenza:

Frazione (Tannini) che si lega alla polvere di pelle standard.

d. Indice di gonfiore:

In acqua.

e. Indice di schiumatura:

Altezza della schiuma prodotta da 1 g di materiale nelle condizioni specificate.

4. Valutazione tossicologica:

un. Residui di antiparassitari:

(i) cloruro organico totale

(ii) fosforo organico totale.

b. Arsenico:

Ceppo prodotto su carta HgBr ₂ rispetto alla macchia standard.

c. Metalli pesanti:

Cadmio e piombo

5. Contaminazione microbiologica:

un. Conta aerobica totale vitale.

b. Gli agenti patogeni:

Enterobacteriaceae, E. coli, Salmonella, P. aerogenosa e S. aureus

c. aflatossine:

Con TLC utilizzando miscela standard di aflatossine (B ₁, B ₂, G ₁, G ₂ )

6. Contaminazione radioattiva.

Caratteri macroscopici:

L'identità macroscopica dei materiali delle piante medicinali si basa su forma, dimensioni, colore, caratteristiche superficiali, consistenza, caratteristiche di frattura e aspetto della superficie di taglio.

(i) Dimensioni:

Un righello graduato in millimetri è adeguato per la misurazione della lunghezza, larghezza e spessore dei materiali grezzi.

Piccoli semi e frutti possono essere misurati allineandone 10 su un foglio di carta calibrato, con una spaziatura di 1 mm tra le linee e dividendo il risultato per 10.

(ii) Colore:

Esaminare il campione non trattato sotto la luce del giorno diffusa può essere utilizzato. Il colore del campione deve essere confrontato con quello di un campione di riferimento.

(iii) Caratteristiche di carattestiche, tessiture e fratture superficiali:

Esaminare il campione non trattato. Se necessario, può essere usata una lente d'ingrandimento. Bagnare con acqua o reagenti, secondo necessità, può essere necessario per osservare le caratteristiche di una superficie di taglio.

Tocca il materiale per determinare se è morbido o duro; piegarlo e romperlo per ottenere informazioni sulla fragilità e l'aspetto del piano di frattura, sia esso fibroso, liscio, ruvido e granulare, ecc.

(iv) Odore:

Se si ritiene che il materiale sia innocuo, posizionare una piccola porzione del campione nel palmo della mano o un becher di dimensioni adeguate e inalare lentamente e ripetutamente l'aria sul materiale. Se nessun odore distinto è percepibile, schiacciare il campione tra il pollice e l'indice o tra i palmi delle mani con una leggera pressione. Se il materiale è noto per essere pericoloso, schiacciare con mezzi meccanici e quindi versare una piccola quantità di acqua bollente sul campione frantumato in un becher.

In primo luogo, determinare la forza dell'odore (nessuno, debole, distinto, forte) e poi la sensazione di odore (aromatico, fruttato, ammuffito, ammuffito, rancido, ecc.) È consigliabile un confronto diretto dell'odore con una sostanza definita ( es. la menta piperita dovrebbe avere un odore simile al mentolo, un chiodo di garofano simile all'eugenolo).

(v) Gusto:

chirata:

Amaro

Glycyrrhiza:

Dolce

Limone:

Sour.

Determinazione di acqua e materia volatile:

Un eccesso di acqua nei materiali delle piante medicinali incoraggerà la crescita microbica, la presenza di funghi o insetti e il deterioramento dopo l'idrolisi. È quindi opportuno stabilire i limiti del contenuto di acqua per ogni materiale vegetale fornito. Questo è particolarmente importante per i materiali che assorbono facilmente l'umidità o si deteriorano rapidamente in presenza di acqua.

I seguenti metodi sono usati come:

1. Metodo azeotropico:

L'Azeotropico fornisce una misura diretta dell'acqua presente nel materiale in esame. Quando il campione viene distillato insieme ad un solvente immiscibile, come toluene R o Xilene R _1, l'acqua presente nel campione viene assorbita dal solvente. L'acqua e il solvente vengono distillati insieme e separati nel tubo ricevente durante il raffreddamento. Se il solvente è anidro, l'acqua può rimanere assorbita al suo interno con risultati falsi. È quindi consigliabile saturare il solvente con acqua prima dell'uso.

2. Perdita di essiccazione:

L'essiccazione può essere effettuata sia mediante riscaldamento a 100-105 ° C o in essiccatori su pentossido di fosforo R a pressione atmosferica o ridotta a temperatura ambiente per un periodo di tempo specificato. Il metodo di essiccamento è particolarmente utile per i materiali che si fondono con una massa adesiva a temperatura elevata.

Determinazione dell'attività emolitica:

Molti materiali vegetali medicinali, in particolare quelli derivati ​​dalle famiglie Araliaceae, Sapindaceae, Primulaceae e Dioscoreaceae contengono saponine. La proprietà più caratteristica delle saponine è la loro capacità di causare emolisi quando si aggiunge a una sospensione di sangue, le saponine producono cambiamenti nella membrana dell'eritrocito, causando la diffusione dell'emoglobina nel mezzo circostante.

L'attività emolitica dei materiali vegetali, o una preparazione contenente saponine, viene determinata confrontandola con quella di un materiale di riferimento, la saponina R, che ha un'attività emolitica di 1000 unità per gm. Una sospensione di eritrociti è mescolata con volumi uguali di una diluizione seriale dell'estratto di materiale vegetale. La concentrazione più bassa per influenzare l'emolisi completa viene determinata dopo aver lasciato riposare le miscele per un determinato periodo di tempo. Un test simile viene eseguito contemporaneamente alla saponina.

Determinazione dell'indice di gonfiore:

Molti materiali vegetali sono di utilità terapeutica o farmaceutica specifica a causa delle loro proprietà di rigonfiamento, in particolare delle gengive e di quelli che contengono una quantità apprezzabile di mucillagine, pectina o emicellulosa.

Procedura:

Pesare con precisione 1 grammo di materiale vegetale in un cilindro graduato con tappo di vetro da 25 ml. Il diametro interno del cilindro deve essere di circa 16 mm, la lunghezza della porzione graduata di circa 125 mm, indicata in 0, 2 ml di divisione da 0 a 25 ml in direzione ascendente.

Ad 25 ml di acqua e agitare accuratamente la miscela ogni 10 minuti per 1 ora. lasciare riposare per 3 ore a temperatura ambiente. Misurare il volume in ml occupato dal materiale vegetale, inclusa qualsiasi mucillagine appiccicosa. Calcola il valore medio della determinazione individuale.

Determinazione dell'indice di schiumatura:

I materiali vegetali contengono saponine che possono causare schiuma persistente, quando un decotto acquoso viene agitato.

Procedura:

Pesare con precisione 1 g di polvere grossolana di materiale vegetale e trasferirla in una beuta da 500 ml contenente 100 ml di acqua bollente. Mantenere a ebollizione moderata per 30 minuti. Raffreddare e filtrare in un matraccio tarato da 100 ml e aggiungere acqua sufficiente attraverso il filtro per diluire al volume. Versare il decotto in 10 provette tappate in porzioni successive da 1 ml, 2 ml, 3 ml, ecc. Fino a 10 ml e regolare il volume del liquido in ogni provetta con acqua a 10 ml. tappare i tubi e scuoterli in un movimento longitudinale per 15 secondi, due scosse al secondo.

Lasciare riposare per 15 minuti e misurare l'altezza della schiuma. Se l'altezza della schiuma in ogni tubo è inferiore a 1 cm, l'indice di schiumatura è inferiore a 100. Se viene misurata un'altezza di schiuma di 1 cm in qualsiasi tubo, il volume del decotto di materiale vegetale nel tubo (a) è usato per determinare l'indice.

Se questa provetta è la prima o la seconda provetta di una serie, preparare una diluizione intermedia in modo simile per ottenere un risultato più preciso. Se l'altezza della schiuma è superiore a 1 cm in ogni provetta, l'indice di schiumatura è superiore a 1000 nel caso ripetere la determinazione utilizzando una nuova serie di diluizioni del decotto per ottenere un risultato.

Indice di schiumatura = 1000 / a

Dove a = il volume in ml del decotto utilizzato per preparare la diluizione nella provetta in cui si osserva la formazione di schiuma ad un'altezza di 1 cm.

Determinazione delle contaminazioni microbiche:

A. Test per Salmonella:

Prendere 10 grammi di materiale in polvere e aumentare il volume fino a 100 ml con il brodo di lattosio. La miscela viene incubata a 35-37 ° C per 4 ore. Vengono prelevati altri 10 ml di questo campione. Si aggiungono 100 ml di brodo di bile verde brillante tetra metilene e si incubano a 37-40 ° C per 24 ore. Un campione da 1 ml viene prelevato da esso e posto su un terreno agar xiloso lisina desossiccholato.

Può anche essere usato agar citrato di desossicolato o agar verde brillante. Questo viene incubato a 35 ° C per 50 ore. Piccolo trasparente e incolore con una zona opaca, rosa (circondata da una zona da rosa a rossa) indica la presenza di S. typhi.

Test biochimico: le colonie ottenute dalla suddetta coltura sono trattate con antisieri polivalenti della salmonella. Questo è noto come sierotipo o test di agglutinazione su vetrino. L'aspetto di aggregazione delle cellule conferma la presenza di specie di salmonella.

B. Test per E. coli:

Un farmaco viene testato per la presenza di E. coli prendendo 10 grammi di materiale in polvere e rendendo il volume fino a 100 ml con brodo di lattosio.

Questa miscela deve essere incubata per 4 ore a 35-37 ° C. Si preleva un campione da 1 ml e si effettuano diluizioni seriali con 9 ml di brodo MacConkey di concentrazioni 100 mg / ml, 10 mg / ml, 0, 1 mg / ml e 0, 01 mg / ml. questi campioni vengono incubati a 37 ° C per 18 ore. un ml di ciascuno viene incubato su terreno agar MacConkey e ulteriormente incubato per 24 ore a 35-37 ° C crescita di colonie generalmente non mucoidi rosse di barre gram negative che indicano la presenza di E. coli.

C. Test per Staphylococcus aureus:

Prendere 10 g di polvere e portare a volume fino a 100 ml con brodo NA. Questa miscela viene incubata a 35-37 ° C per 4 ore. Un ml di questo campione viene placcato su terreno di coltura Baird-Parker F e incubato a 35-37 ° C per 48 ore. Le colonie nere di gram + ve cocci, circondate da zone chiare indicano la presenza di Staphylococcus aureus.

Determinazione dei tannini:

I tannini sono sostanze in grado di trasformare le pelli di animali in pelle legando le proteine ​​per formare sostanze insuluabili che resistono agli enzimi proteolitici. Questo processo, applicato al tessuto vivente, è noto come azione "astringente" ed è la ragione per l'applicazione terapeutica dei tannini.

Metodo:

Pesare con precisione 10 g di polvere vegetale fine in una beuta conica. Aggiungere 150 ml di acqua e scaldare su un bagnomaria bollente per 30 minuti. Raffreddare, trasferire la miscela in un matraccio tarato da 250 ml e diluire in volume con acqua. Lasciare che il materiale solido si depositi e filtrare il liquido attraverso una carta da filtro, diametro 12 cm, scartando i primi 50 ml del filtrato.

Per determinare la quantità totale di materiale estraibile in acqua, far evaporare 50 ml dell'estratto di materiale vegetale a secco, asciugare il residuo in un forno a 105 ° C per 4 ore e pesare (T ₁ ).

Per determinare la quantità di materiale vegetale non legato a nascondere polvere e agitare bene per 60 minuti. Filtrare ed evaporare a secco fino a 50 ml del filtrato limpido. Asciugare il residuo in un forno a 105 ° C e pesare (T ₂ ).

Per determinare la solubilità della polvere di pelle, prendere 6 g di polvere di pelle, aggiungere 80 ml di acqua e agitare bene per 60 minuti. Filtrare ed evaporare a secco fino a 50 ml del filtrato limpido. Asciugare il residuo in un forno a 105 ° C e pesare (T ₀ ).

Calcola la quantità di tannini come percentuale usando la seguente formula:

[T1 - (T2 - T0)] x 500 / w

Dove w = il peso del materiale vegetale in grammi.

Determinazione dei residui di antiparassitari:

1. Determinazione dei cloruri:

io. Apparecchio:

La determinazione viene effettuata con uno spettrofotometro in grado di misurare l'assorbanza a 460 nm utilizzando celle di assorbimento con lunghezze del percorso di 2 cm e 10 cm

ii. Procedura:

Mettere 15 ml della soluzione ottenuta dopo la combustione in una beuta da 50 ml insieme a 1 ml di solfato di ammonio ferrico (0, 25 mol / l) e 3 ml di tiocianato mercurico. Agitare il contenuto del matraccio e lasciare riposare per 10 minuti. Trasferire una parte della soluzione in una cella da 2 cm e misurare l'assorbanza a 460 nm utilizzando acqua nella cella di riferimento. La lettura dovrebbe essere fatta prontamente per minimizzare l'assorbimento di cloruro dall'aria.

Preparare una soluzione standard di cloruro di sodio contenente 5 hg di cloruro per ml. Trasferire aliquote di questa soluzione (0 ml, 2 ml, 4 ml, 6 ml, 8 ml e 10 ml) in una serie di matracci conici da 50 ml e diluire a 15 ml con acqua. Sviluppa il colore e misura l'assorbanza come descritto sopra. Tracciare l'assorbanza rispetto al contenuto di cloruro delle diluizioni in ml e interpolare il contenuto di cloruro delle soluzioni del materiale testato.

2. Test limite per l'arsenico:

io. Apparecchio:

L'apparecchio consiste in un flacone da 100 ml o una beuta conica chiusa con un tappo di gomma o di vetro smerigliato attraverso il quale passa un tubo di vetro. La parte inferiore del tubo è disegnata per un diametro interno di 1, 0 mm, e 15 mm dalla sua punta è un orifizio laterale da 2 a 3 mm di diametro.

Quando il tubo è in posizione nel tappo, l'orifizio laterale deve trovarsi ad almeno 3 mm sotto la superficie inferiore del tappo. L'estremità superiore del tubo ha una superficie perfettamente piana ad angolo retto rispetto all'asse del tubo.

Un secondo tubo di vetro dello stesso diametro interno e 30 mm di lunghezza, con una superficie piatta simile, è posto in molle a contatto o clip. Inserire nel tubo inferiore da 50 a 60 mg di cotone acetato di piombo, confezionato in modo leggero o un piccolo tappo di cotone e un pezzo di carta in acetato di piombo laminato del peso compreso tra 50 e 60 mg. tra le superfici piatte dei tubi posizionare un disco o una piccola carta di cloruro mercurico grande abbastanza da coprire l'orifizio del tubo.

ii. Procedura:

La soluzione di prova sta introducendo nella bottiglia o nella beuta conica; aggiungere 5 ml di ioduro di potassio 1 M e 10 g di zinco come T. Montare immediatamente l'apparecchio e immergere il pallone in un bagno d'acqua a una temperatura tale da mantenere un'evoluzione uniforme del gas.

Dopo 40 minuti, qualsiasi macchia prodotta sulla carta di cloruro mercurico non è più intensa di quella ottenuta trattando nello stesso modo 1, 0 mi di soluzione standard di arsenico (10 ppm come) diluita a 50 mi con acqua.

3. Determinazione dei metalli pesanti:

io. Soluzione standard:

In una pipetta per cilindro Nessler da 50 ml 1, 0 ml di soluzione standard di piombo (20 ppm Pb) e diluire con acqua a 25 ml. aggiustare con acido diluito diluito o soluzione di ammoniaca diluita a pH compreso tra 3, 0 e 4, 0, diluire con acqua a circa 35 ml e mescolare.

ii. Soluzione di prova:

In un cilindro Nessler da 50 ml mettere 25 ml della soluzione preparata per la prova come indicato nella monografia individuale o sciogliere la quantità specificata della sostanza esaminata in acqua sufficiente a produrre 25 ml. aggiustare con acido acetico diluito o soluzione di ammoniaca diluita a pH compreso tra 3 e 4 diluito con acqua a circa 35 ml e mescolare.

iii. Procedura:

A ciascuno dei cilindri contenenti la soluzione standard e la soluzione di prova rispettivamente aggiungere 10 ml di soluzione di idrogeno solforato appena preparato, mescolare, diluire a 50 ml con acqua, lasciare riposare per 5 minuti e guardare verso il basso su una superficie bianca; il colore prodotto con la soluzione di prova non è più intenso di quello prodotto con la soluzione standard.